构巢曲霉PCR检测试剂盒说明书_资料下载

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构巢曲霉PCR检测试剂盒说明书

点击次数： 166发布时间：2026/3/27 15:17:12

上传者：上海谷研实业有限公司
上传时间： 2026/3/27 15:17:12
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资料简介：

构巢曲霉PCR检测试剂盒说明书

【产品名称】: 构巢曲霉PCR检测试剂盒

【英文名称】: Aspergillus nidulansPCR

【储存条件及有效期】:

-20℃避光保存,避免反复冻融,有效期6个月。

【样本采集、存放及运输】

样本采集:各类型样本按照常规方法采集;

存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(最多冻融3次);

运输:采用或泡沫箱加冰密封进行运输。

【自备试剂】:

核酸提取试剂,如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒,也可选择其他合适的核酸提取产品。

特点:

因此快速灵敏检测构巢曲霉具有重要意义。本产品就是为此目的根据PCR 原理开发的试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供 DNA 模板。

2. 引物经过精心优化，专一性强，只扩增构巢曲霉，与其他植物没有交叉反应。

3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4. PCR mix 中含上样染料，PCR 后可以直接上样电泳。

5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

使用方法：

一、样品DNA 的制备

1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。

2. 如果有 N 个样品，则需要做 N+2 个提取，包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水（取决于试剂盒要求的样品起始量）中加 10μL 构巢曲霉 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得，样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后得到模板 DNA 放冰上待用。组成及试剂配制:

酶标板:一块(96孔)

2、标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3、样品稀释液:1×20ml。

4、检测稀释液A:1×10ml。

5、检测稀释液B:1×10ml。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

PCR常见问题的常见原因

1. cDNA产量的很低可能的原因：

1) RNA模板质量低

2）对mRNA浓度估计过高

3) 反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足

4) 同位素磷32过期

5) 反应体积过大，不应超过50μl

2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅

1) 最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系

2）与反应起始时RNA的总量及纯度有关

3）建议在试验中加入对照RNA

4）链的反应产物在进行PCR扩增时，在总的反应体系中的含量不要超过1/10

5）建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物（GSP）用于链合成。由于RNA模板存在二级结构，如环状结果，有可能导致GSP无法与模板退火；或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。

6）目的mRNA中含有强的转录中止位点，可以试用以下方法解决：

a. 将链的反应温度提高至50℃。

b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行链反应。

试剂盒

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elisa酶联免疫检测试剂盒

ＲＮＡ/ＤＮＡ提取

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elisa试剂盒

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生化试剂

试剂盒

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