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红色荧光核酸染料
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详细内容
中文名称:红色荧光核酸染料
英文名称:GelHong nucleic acid gel dye
产品规格:500μL
产品货号:GOY-F9975
| GelHong核酸红色荧光染料是一种可以替代溴化乙锭(EB)的红色荧光核酸染色剂。与SYBR或EB相比,GelHong显著的特性是其在多种条件下的高灵敏性和稳定性。另外相对EB或SYBR,GelHong诱导突变的能力低。 保存:4~8℃,有效期两年。室温避光可保存6个月。 使用方法: 染料使用应在室温下彻底融化混匀后使用。 GelHong预染方法(推荐): 将GelHong试剂按1:10000溶于琼脂糖凝胶溶液中,充分混匀。例如:将5μL GelHong试剂加入到50mL凝胶溶液中。 注意:由于GelHong具有出色的热稳定性,可将试剂直接加入高温的凝胶溶液中,而不用等凝胶溶液冷却后再加入。 浇制凝胶并使其凝固后上样电泳。 注意:使用这种预先加入染色剂的琼脂糖凝胶,每次不易加入太多的DNA样品,否则容易造成饱和现象,可以做多个不同浓度的DNA Marker,以确定佳DNA上样量。 紫外下观察结果。 注意:如果始终出现拖尾或是条带无法分离的现象,您可以使用后染法对DNA染色,以确认问题是否与染色剂有关。如果使用后染法问题依旧存在,则说明问题与染色剂无关,请尝试减少核酸的上样量后进行电泳。 GelHong后染方法: 用H2O将GelHong稀释约3300倍到0.1M NaCl中,制成3X染色溶液。例如:将15μL GelHong和5mL的1M NaCl加入到45mL H2O中。 注意:GelHong 1X染色溶液同样可用于后染,但其灵敏度要低于3X染色溶液。 将凝胶小心地放入合适的容器中,如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3X染色溶液浸没凝胶。 在室温下轻轻地摇动凝胶板,佳的染胶时间为30分钟,这取决于凝胶板的厚度、琼脂糖或聚丙烯酰胺的浓度和DNA的长短。凝胶越厚或琼脂糖的浓度越高,染色所需要的时间就越长。 注意:染色溶液至少可重复使用2~3次。如果不是立即再用的话,建议将用过的染色溶液冷藏保存。 紫外下观察结果。 |
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
Atlastin3蛋白(ATL3)酶联免疫试剂盒3-丁炔-2-酮 97%N-乙酰-DL-甲硫氨酸 99%茶黄素-3'-没食子酸酯
红色荧光核酸染料6,6'-Di-O-sinapoylsucrose
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