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Goldview核酸染料(10000×)
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详细内容
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
产品属性:
中文名称:Goldview核酸染料(10000×)
英文名称:Goldview Nucleic Acid Gel Stain (10,000×)
产品规格:1ml
产品货号:GOY-F9973
| GoldView是一种可替代溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA 时,其与DNA发生结合并产生很的荧光信号,灵敏度与 EB 相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈现红色荧光。GoldView特别适合大片段(>1 kb)DNA的检测,灵敏度高。也可用于RNA的染色。 使用方法 1) 将100 ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%-2%)在微波炉中融化。 2) 加入5-10 μl GoldView(若背景过高可以适当减少用量;若灵敏度过低,可以适当增加用量),轻轻摇匀,避免产生气泡。 3) 冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。 4) 电泳完毕,使用凝胶成像系统或可见光透射仪观测。注:若使用凝胶成像系统照相时,通过调节光圈、曝光时间选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。 注意事项 1) 胶厚度不宜过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。 2) 加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响。 3) GoldView特别适用于大片段(>1 kb)DNA的检测。对于更小片段的DNA,特别是<500bp检测信号可能很弱或者无信号。对于<500bp的DNA染色,建议使用SYBR Green I 核酸染料。 4) 含GoldView的凝胶不适合进行胶回收实验。 5) Goldview的主要成分是吖啶橙,具有细胞渗透性,有一定的细胞毒性。建议操作人员使用时做好防护措施,带上手套和口罩。并妥善处理好废弃物。 6) 另提供无毒的EB替代物-Dured核酸染料(SY0244),烈推荐使用。 7) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 储存条件:RT。 |
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
B类清道夫受体1(SCARB1)酶联免疫试剂盒1,3-二溴-2- 85%苯酮 98%白术内酯Ⅰ(标准品)
Goldview核酸染料(10000×)Sibiricose A1
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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