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立克次体染色液(改良Macchiavello法)
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:立克次体染色液(改良Macchiavello法)
英文名称:
产品规格:3×50ml
发货周期:1~3天
用途:
立克次体和病毒包涵体染色,改良马氏法
注意事项:
立克次体和一些病毒包涵体呈红色,背景呈蓝色。
储存条件:4℃,避光,6个月
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. 避光保存及使用。
3. 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
衍生(for HPLC), ≥99.0% (GC)环指蛋白41抗体
固体亚 AR,99%核质蛋白21抗体
六标准溶液 10.0ng/μL,体:异辛烷RAS癌因相关蛋白Rab6C抗体
化铟 99.9% metals basisRAP1GAP酶激活蛋白抗体
硫铟 无水,99.99% metals basis原癌因酪氨蛋白激酶受体RET/多发性内分泌腺瘤和状腺髓样癌蛋白抗体
氢氧化铟 99.99% metals basis化原癌因酪氨蛋白激酶受体RET抗体
八氟萘溶液 100pg/μL,体:异辛烷G蛋白家族RAB21蛋白抗体
纳米氮化铝 99.9% metals basis,50nm泛素结合蛋白P62抗体
碳化 99%,50nmRap2A抗体
纳米碳化硅 99.9% metals basis,40nm胰岛β生长因子Reg IIIγ抗体
氮化硅 99%,20nm胰岛β生长因子Reg IIIα 抗体
碳化钛 99%,40nm核糖体蛋白S6修饰样蛋白A抗体
氮化钛 99%,20nmRFTN2蛋白抗体
氮化钛 99.5%,2-10 μm环指蛋白213
碳化锆 50nm, 99%受体结合丝氨苏氨激酶3抗体
立克次体染色液(改良Macchiavello法)蛋白激酶GCN2蛋白抗体Human USP38 ELISA Kit促进凋亡基因抗体流式组化
G蛋白偶联受体GPR78蛋白抗体Human USP39(Inactive ubiquitin-specific peptidase 39) ELISA Kit钙结合蛋白抗体流式组化
G蛋白激活内流通道蛋白2抗体Human USP44 ELISA Kit兔抗非洲爪蟾IGC抗体流式组化
生长因子受体结合蛋白10抗体Human USP45 ELISA Kit原癌基因K-ras抗体流式组化
磷酸化生长因子受体结合蛋白10抗体Human USP42 ELISA KitL-精氨酸盐酸盐
磷酸化糖原合酶激酶3β抗体Human USP25 ELISA KitDL-胱氨酸
磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗体Human USP24 ELISA Kitα-淀粉酶(枯草杆)
磷酸化蛋白激酶GCN2蛋白抗体Human USP28 ELISA Kit20mg,ml蛋白酶K溶液
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