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鞭毛染色液(Leifson法)
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:鞭毛染色液(Leifson法)
英文名称:
产品规格:3×50ml
发货周期:1~3天
用途:
鞭毛染色
注意事项:
又叫利夫森氏染色法,主要由鞣酸、碱性品红等组成,染色后菌体和鞭毛呈红色。
储存条件:室温,避光,12个月
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. 避光保存及使用。
3. 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
五二钒 GR,99.5%(剧品)蛋白酶2Cα抗体ART3 二腺苷核糖转移酶3抗体
原丁酯 97%化桩蛋白Paxillin抗体ARSK 芳香硫酯酶K抗体
铋粉 99.99% metals basis,200目神经胞浆蛋白9.5抗体(蛋白因产物9.5)ARSH 芳香硫酯酶H抗体
锡 99.99% metals basis化蛋白激酶Aβ抗体ARSF 芳香硫酯酶F抗体
化铵 CP,98.5%蛋白激酶A受体2α亚抗体ARSB 芳硫酯酶B抗体
醋己定 98%化蛋白激酶A受体2α亚抗体ARSA 芳香硫酯酶1抗体
双烯雌酚 96%蛋白激酶Aγ抗体ARSA 芳硫酯酶A抗体
己烯雌酚 99%蛋白激酶受体相关1β抗体ARRDC4 抑制蛋白结构域蛋白4抗体
尼泊金乙酯 CP,99.0% B淋巴诱导成熟蛋白1抗体ARRDC3 抑制蛋白结构域蛋白3抗体
荧光素钠 AR化酪氨酶α抗体ARRDC2 抑制蛋白结构域蛋白2抗体
己烷雌酚 分析标准品蛋白激酶A调节亚a1抗体ARRDC1 抑制蛋白结构域蛋白1抗体
己烷雌酚 98%化酪氨酶α抗体ARP4 肝血管生成素相关蛋白抗体
六次四 ACS, ≥99.0%PDZ结构域PDZK5A蛋白抗体Aromatase 芳香化酶抗体
4-伞形酮 98%脂水解酶1抗体Aromatase 芳香化酶/色素P450/雌激素合成酶抗体
酚酞 Indicator抑癌因p16/p14/P19抗体ARNT2 芳香烃受体核转录蛋白2抗体
鞭毛染色液(Leifson法)纤维蛋白原β链抗体Human HTR2A (5-hydroxytryptamine receptor 2A) ELISA KITD-半乳糖醛酸
构成激活过氧化酶活化增生受体γ样蛋白2抗体Human MTRR (Methionine synthase reductase) ELISA KIT异丙基-β-D-硫代半乳糖苷
成蛋白相关蛋白1抗体Human PFKFB1 (6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase 1) ELISA KIT宝石红蛋白染色试剂
肿瘤病受体同源蛋白抗体Human PGLS (6-phosphogluconolactonase) ELISA KIT葡聚糖凝胶G-150
成纤维生长因子11抗体Human ZNHIT2 ELISA Kit异丙醇
HSD13蛋白抗体Human DHCR7 (7-dehydrocholesterol reductase) ELISA KIT顺二酸二甲酯
Wnt信号受体FZD2蛋白抗体Human ZNHIT1 ELISA Kit咪唑
口蹄疫病Human ZNRF2(Zinc and ring finger 2) ELISA Kit四乙酸铅
热门标签:鞭毛,染色液,Leifson法













