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细胞固定/破膜试剂盒
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详细内容
中文名称:细胞固定/破膜试剂盒
英文名称:
产品规格:150ml
发货周期:1~3天
固定液、破膜剂用于细胞内细胞因子染色对细胞膜的处理。固定液起稳定细胞膜、保持细胞膜表面抗体与抗原结合的作用;破膜剂使流动的、完整的细胞膜产生小孔以利于抗体进入细胞。用流式细胞仪检测细胞内抗原及DNA时,对待测细胞进行固定、破膜处理后,加入相应抗体或检测试剂,孵育一定时间即可上机分析。
储存条件:4℃避光保存,勿冰冻。
有效期:一年。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
对羟丁酯 CP,98%鸡低密度脂蛋白(LDL)免疫试剂盒岩藻糖变旋酶抗体MAGEA5 黑色素瘤相关抗原5抗体
对羟丁酯 分析标准品,>99.5%(GC)鸡的牛血清白蛋白(BSA)免疫试剂盒X三体综合征相关蛋白FUNDC1抗体MAGE-A4 黑色素瘤相关抗原4抗体
尼泊金乙酯 CP,99.0% 鸡胆囊收缩素A受体(CCKAR)免疫试剂盒弗林蛋白酶抗体MAGEA2 黑色素瘤相关抗原2抗体
尼泊金乙酯 AR,99%鸡单纯疱疹病Ⅱ型抗体(HSVⅡ-Ab)免疫试剂盒富含丝氨/精氨重复结构蛋白抗体MAGEA12 黑色素瘤相关抗原12抗体
尼泊金乙酯 分析标准品,99.7%鸡催素(PRL/LTH)免疫试剂盒岩藻糖转移酶6抗体MAGEA11 黑色素瘤相关抗原11抗体
对羟 99%鸡促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒岩藻糖转移酶7抗体MAGEA11 黑色素瘤相关抗原11抗体
4-羟 98%鸡促卵泡素(FSH)免疫试剂盒眼睛和头发颜色相关蛋白FUZ抗体MAGEA10 黑色素瘤相关抗原10抗体
4-羟 分析标准品鸡促状腺素(TSH)免疫试剂盒滤泡型转运蛋白1/II型慢性淋巴性白血病抗体MAGE-1 黑色素瘤相关抗原抗体
4-羟异酯 99%鸡雌二(E2)免疫试剂盒化碱性成纤维生长因子受体1抗体MAG-a/L-MAG 髓鞘相关糖蛋白-a抗体
对羟酯 GR,99.0%鸡传染性支气管炎(IB)抗体免疫试剂盒FAM65B蛋白抗体MAG-a/b 髓鞘相关糖蛋白a/b抗体
对羟酯 分析标准品鸡传染性法氏囊病(IBD)抗体免疫试剂盒胞外分泌型丝氨/苏氨蛋白激酶FAM20C抗体MAG1 肺癌转移相关蛋白抗体
对羟酯 CP,98%鸡触珠蛋白相关蛋白(HPR)免疫试剂盒凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相关抗原抗体MAFbx/Fbx32 泛素蛋白连接酶抗体
氟 AR,99.0%鸡超氧化物歧化酶(SOD)免疫试剂盒纤维母生长因子受体底物3抗体Mafa v-maf 肌腱膜纤维肉瘤癌因同源物A抗体
α-托品 98%鸡层连蛋白/板层素(LN)免疫试剂盒纤维连接蛋白抗体MAdCAM-1 粘膜血管定居因子抗体
六二硅脲 98%鸡补体蛋白4(C4)免疫试剂盒FCHO1蛋白抗体MAdCAM1 粘膜粘附分子1抗体
细胞固定/破膜试剂盒生长调控蛋白19/环指蛋白197抗体Human F5(Coagulation Factor V/Plasma Factor V) ELISA Kit蟾他灵 Bufotaline
卷曲螺旋结构域蛋白139抗体Human F13B(Coagulation Factor XIII B Polypeptide) ELISA KitFMOC-D-丝氨酸
染色体修饰蛋白1抗体(金属蛋白酶1)Human HDAC2(Histone Deacetylase 2) ELISA Kit抗蛋白酶
钙依赖分泌激活蛋白1抗体Human HCCS(Holocytochrome C Synthase) ELISA Kit卡那霉素硫酸盐
小脑肽1抗体Human GSTα4(Glutathione S Transferase Alpha 4) ELISA Kit鸟嘌呤盐酸盐
小脑肽2抗体Human GSTα5(Glutathione S Transferase Alpha 5) ELISA Kit转移核糖核酸(酵母)
小脑肽4抗体Human Hepc(Hepcidin) ELISA Kit核糖核酸钠盐(酵母)
脑海绵状血管畸形蛋白2抗体Human GPR37(G Protein Coupled Receptor 37) ELISA Kit透析袋6000
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