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即用型DAPI染色液
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详细内容
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中文名称:即用型DAPI染色液
英文名称:
产品规格:10ml|50ml
发货周期:1~3天
DAPI(4,6-Diamidino-2-phenylindole ,4,6-二氨基-2-苯基吲哚)是一种DNA 特异性染料,与DNA产生非嵌入式结合,发出蓝色荧光。该染料对细胞膜有半通透性,可透过正常活细胞产生较弱的蓝色荧光(细胞固定后荧光增强),而凋亡细胞的膜通透性增加,对其摄取能力增强,产生很强蓝光染色。
正常细胞的核形态呈圆形,边缘清晰,染色均匀,而凋亡细胞的细胞核边缘不规则,细胞核染色体浓集,着色较重,并伴有细胞核固缩,核小体碎片增加,因此从荧光强度及核形态均可鉴别出细胞发生凋亡的典型特征。
操作方法(本方法针对贴壁细胞,但不仅限于贴壁细胞)
1. 贴壁培养的细胞爬片弃去培养基,10mM PBS,pH7.4,洗一次;
2. 再滴加入100μL 的DAPI 染液,室温避光染色5-15 min;
3. 弃去染色液,PBS 漂洗一次,
4. 滴加甘油或Buffer A,荧光显微镜以340/380nm 紫外光激发,500×(40×12.5)(好是100×油镜头)观察、拍照。
储存:2-8℃,避光,有效期6个月。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
(R)-3-(3-氟)-5-羟恶唑烷-2-酮 98%牛α干扰素(IFN-α)免疫试剂盒FAM59B蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/Cy5 Cy5标记的小鼠抗羊IgG
3-羟喹啉 97%牛α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫试剂盒FAM59A蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/Cy3 Cy3标记的小鼠抗羊IgG
6-羟吲哚 98%牛P物质(SP)免疫试剂盒FAM160B1蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/Bio 生物素标记的小鼠抗羊IgG
2-羟-6-吡 98%牛N-乙酰-β-D-氨葡萄糖苷酶(NAG)免疫试剂盒FAM161B蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/APC APC标记的小鼠抗羊IgG
4--1--1H-吡唑 97%牛N端脑钠素(NT-proBNP)免疫试剂盒FAM151A蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/AP 碱性酶(AP)标记的小鼠抗羊IgG
4--1H-咪唑 97%牛D-免疫试剂盒跨膜蛋白29抗体Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的小鼠抗羊IgG
4-乙酰氧吲哚 99%牛C肽(C-Peptide)免疫试剂盒FAM154A蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的小鼠抗羊IgG
氨乙盐盐 98%牛C反应蛋白(CRP)免疫试剂盒FAM155A蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的小鼠抗羊IgG
反-8--6-壬酰 97%牛5羟色/血清素/血清(5HT/ST)免疫试剂盒FAM164B蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的小鼠抗羊IgG
3-氨噻吩-2-羧酯 99%牛Ⅲ型胶原氨末端肽(PⅢNP)免疫试剂盒FRMD3蛋白抗体Mouse anti-Goat IgG ascites 小鼠抗羊IgG腹水
3-氨-2-氧吡啶 98%牛1-脂酰肌-4,5 - 二二酯酶ζ1(PLCZ1)免疫试剂盒FRMD4B蛋白抗体Mouse Anti-Goat IgG 小鼠抗羊IgG
4-硝吲哚 98%牛17羟孕酮(17-OHP)免疫试剂盒FRMD7蛋白抗体Mouse anti-Bovine IgG ascites 小鼠抗牛IgG腹水
5-嘧啶 99%牛1,25二羟维生素D3(1,25 DHVD3)免疫试剂盒FRMD4A蛋白抗体Mouse Anti-Bov IgG/RBITC 罗丹明标记的小鼠抗牛IgG
1-(4-吡啶)哌 97%绵羊ELISA试剂盒延胡索酰乙酰乙水解酶抗体Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的小鼠抗牛IgG
2,4-二羟喹啉 97%绵羊组(HIS)免疫试剂盒FAM101A蛋白抗体Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的小鼠抗牛IgG
即用型DAPI染色液染色质解旋酶DNA结合蛋白Mi2β抗体Human MMP-10(Matrix Metalloproteinase 10) ELISA Kit人抗流行性出血热病抗体IgM (EHF)ELISA试剂盒, EHF ELISA
ATP依赖的解旋酶CHD6抗体Human MUC3(Mucin 3) ELISA Kit人基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒,
ATP依赖的解旋酶CHD7抗体Human MUC6(Mucin 6) ELISA Kit人八聚体转录因子(OTF2B)ELISA试剂盒,
ATP依赖的解旋酶CHD8抗体Human N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA Kit人核糖核酸(Irna)ELISA试剂盒,
趋化因子受体D6抗体Human NKB(Neurokinin B) ELISA Kit人阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒,
钙稳态内质网蛋白抗体Human MUSKab(Muscle Skeletal Receptor Tyrosine Kinase antibody) ELISA Kit人上皮特异性抗原(ESA)ELISA试剂盒,
CHES1蛋白抗体Human NPYR1(Neuropeptide Y Receptor Y1) ELISA Kit人球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒,
哺乳动物酸性几丁质酶抗体Human MYCBP(C-Myc Binding Protein) ELISA Kit小鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
热门标签:即用型DAPI,染色液













