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oechst 33258染色液(即用型)
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详细内容
英文名称:
产品规格:10ml|50ml
发货周期:1~3天
细胞凋亡时产生显著的变化是染色体固缩,DNA 裂解使细胞核形态产发生变化。荧光染料Hoechst33258 是一种无毒、水溶性双苯咪唑类化合物,可作为荧光探针与DNA 分子结合。
在凋亡细胞中,细胞膜对Hoechst 33258 的摄取增高,并且由于染色体高度浓缩,Hoechst 33258 与之结合增强,染色呈强蓝色荧光,而正常细胞只呈微弱荧光,死细胞则不被染色,由此可检测出凋亡。
操作方法(以下操作针对细胞爬片进行)????????????????????
1. 培养细胞并爬片;
2. 用冷PBS 洗涤细胞二次(贴壁细胞原位固定染色)
3. 加入500μL 的4%溶液(用户自备),4℃固定细胞10-30min;
4. 洗去固定液,用PBS 洗两遍;
5. 滴加100μL Hoechst 33258 染色液,室温染色10 min,水冲净晾干;
6. 滴加一滴防淬灭封片液覆盖样本;
7. 以紫外光340nm 波长激发,发射波长为460nm,可以在荧光显微镜下观察。
储存:4℃,避光,有效期6个月。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
氨聚乙烯微球 diameter 8.0 - 8.9μm,5% w/v 牛高密度脂蛋白(HDL)免疫试剂盒FA20A抗体Mouse Anti-human IgG/AP 碱性酶(AP)标记的小鼠抗人IgG
氨聚乙烯微球 diameter 9.0 - 9.9μm,5% w/v 牛肝脂酶(HL)免疫试剂盒成纤维生长因子18抗体Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的小鼠抗人IgG
氨聚乙烯微球 diameter >10μm ,2.5% w/v牛甘油-3-脱氢酶(GAPDH)免疫试剂盒叉头蛋白O1抗体Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的小鼠抗人IgG
羧聚乙烯微球 diameter 0.05 - 0.1μm ,2.5% w/v 牛甘胆(CG)免疫试剂盒纤维母生长因子6抗体Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的小鼠抗人IgG
羧聚乙烯微球 diameter 0.2 - 0.5μm ,2.5% w/v 牛甘肽(GAL)免疫试剂盒免疫球蛋白A Fc段受体1抗体Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的小鼠抗人IgG
羧聚乙烯微球 diameter 0.6 - 1.0μm,2.5% w/v牛干扰素-tau 免疫试剂盒脂肪延长酶抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/RBITC 罗丹明标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 1.0 - 1.9μm,5% w/v牛附睾分泌蛋白E1(NPC2)免疫试剂盒岩藻糖转移酶2抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy7 PE-Cy7标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 2.0 - 2.9μm,5% w/v牛分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫试剂盒鸡白痢、鸡伤寒抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 3.0 - 3.9μm,5% w/v牛肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)免疫试剂盒范可尼贫血相关蛋白F抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-CY5 PE-CY5标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 4.0 - 4.9μm,5% w/v牛肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)免疫试剂盒卵泡抑素抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy3 PE-Cy3标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 5.0 - 5.9μm,5% w/v牛非酯化脂肪(NEFA)免疫试剂盒Fas活化的丝/苏氨激酶抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE PE标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 6.0 - 6.9μm,5% w/v 牛端粒酶(TE)免疫试剂盒脆性组氨三联体抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/HRP 辣根过氧化物酶标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 7.0 - 7.9μm,5% w/v牛低密度脂蛋白(LDL)免疫试剂盒纤维母表面蛋白抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/Gold 胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 8.0 - 8.9μm,5% w/v牛蛋白聚糖4(PRG4)免疫试剂盒列腺素E受体4相关蛋白抗体Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC FITC标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
羧聚乙烯微球 diameter 9.0 - 9.9 μm,5% w/v牛弹性蛋白酶2,中性粒(ELA2)免疫试剂盒FLAG Tag标签抗体(N端)Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy7 Cy7标记的鼠抗人IgG单克隆抗体
oechst 33258染色液(即用型)羊毛甾14α-去甲基化酶蛋白抗体Human PDCD1LG1(Programmed Cell Death Protein 1 Ligand 1) ELISA Kit兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA试剂盒,
补体C5抗体Human NTRK2(Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2) ELISA Kit兔子β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)ELISA试剂盒,
5号染色体开放阅读框24抗体Human PⅢCP(Procollagen Ⅲ C-Terminal ProPeptide) ELISA Kit鱼卵黄高磷蛋白
5号染色体开放阅读框42抗体Human NTRK3(Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 3) ELISA Kit癌标志物-CA153ELISA试剂盒--动物,人
5号染色体开放阅读框49抗体Human PACAP-38(Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) ELISA KitAndrade氏糖类肉汤
5号染色体开放阅读框35抗体Human PADI4(Peptidyl Arginine Deiminase Type IV) ELISA Kitm-FC肉汤
中心体蛋白192抗体Human MT3(Metallothionein 3) ELISA Kitα-甘油磷酸脱氢酶
中心体蛋白27抗体Human N-ERC/Mesothelin ELISA Kit乳酸过氧化物酶
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