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死细胞核酸染料-绿菁SYTOX
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:死细胞核酸染料-绿菁SYTOX
英文名称:
产品规格:500μL
发货周期:1~3天
SYTOX 绿色死细胞核酸染料( Ex/Em: 502/525 nm, bound to DNA)是一种可轻易穿过受损细胞质膜而不能透过活细胞质膜的绿色核酸染料,其在于核酸结合之后荧光强度会得到超过500 倍的显著增强。SYTOX 绿色死细胞核酸染料可以用于染死的真核细胞的RNA和DNA,在革兰氏细菌中同样也适用。使用者可以利用氩激光激发器的488nm(或者其他任何带有450-490nm 激发光源的激发器)激发染料。
SYTOX 绿色死细胞核酸染料可用于多色荧光分析,在不同的实验应用中染固定细胞的核酸,如,荧光显微镜、荧光酶标仪,流式细胞仪上。
储存:-20℃,避光,有效期6个月。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
2,3,5,4-四羟二乙烯葡萄糖苷 分析标准品,>98%牛游离纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)免疫试剂盒癌因ERG3抗体MSH gamma 促黑激素γ抗体
土贝母苷 分析标准品,>95%牛印度猬因子(IHH)免疫试剂盒猪源产肠素性K88-K99抗体MSH Alpha 促黑激素α抗体
射干苷 分析标准品,>98% 牛乙酰辅酶A羧化酶合成酶(ACC)免疫试剂盒FAS凋亡抑制分子3抗体MSF/Cell division control protein septin D1 周期调控蛋白D1抗体
鸢尾黄素 分析标准品,≥98%牛乙酰辅酶A(acetyl-CoA)免疫试剂盒纤维束1抗体MS4A3/CD20L CD20样蛋白抗体(造血干4跨膜蛋白3)
鸢尾黄素 分析标准品,≥97% 牛胰高血糖素样肽1(GLP-1)免疫试剂盒叉头蛋白P3抗体MRPS4/IMP3 线粒体核糖体蛋白S4抗体
辣椒素 分析标准品,>98%牛胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP⁻⁷)免疫试剂盒免疫球蛋白G Fc段受体IMrpL39 线粒体核糖体蛋白L39
溴 CP,98.0%牛胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)免疫试剂盒叉头蛋白M1抗体MrpL28 线粒体核糖体蛋白L28抗体
溴 99.5%牛胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)免疫试剂盒化雷帕霉素靶蛋白抗体MrpL12 线粒体核糖体蛋白L12抗体
溴 AR,99%牛胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)免疫试剂盒化粘着斑激酶抗体MRP9/ABCC12 多药耐药相关蛋白9抗体
溴 Standard for GC,>99.5%(GC)牛胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)免疫试剂盒丝聚合蛋白/中间丝蛋白抗体MRP8+MRP14 多药耐药相关蛋白8/9/14抗体
3- 98%牛胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)免疫试剂盒肺鼠疫耶尔森氏菌F1荚膜蛋白抗体(C端)MRP8/ABCC11 多药耐药相关蛋白8抗体
1,8-二溴辛烷 98%牛胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒凝血因子13抗体(纤维蛋白稳定因子)MRP7/ABCC10 多药耐药相关蛋白7抗体
1,6-二溴己烷 97%牛胰岛素样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒滤泡树突分泌蛋白抗体MRP5/ABCC5 多药耐药相关蛋白5抗体
2-乙己二酯 90%牛胰岛素(Insulin)免疫试剂盒纤维母生长因子13抗体MRP4/ABCC4 多药耐药相关蛋白4抗体
4-异 98%牛一氧化氮(NO)免疫试剂盒骨骼肌肌球蛋白轻链2抗体MRP3 多药耐药相关蛋白3抗体
死细胞核酸染料-绿菁SYTOX1号染色体开放阅读框159抗体Human PLCγ1(Phospholipase C Gamma 1) ELISA Kit大鼠睾酮(T)ELISA试剂盒,
1号染色体开放阅读框162抗体Human PLB(Phospholipase B) ELISA Kit大鼠烟酰腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)ELISA试剂盒,
1号染色体开放阅读框163抗体Human PKC(Protein Kinase C) ELISA Kit卵黄琼脂培养基基础 用于肉梭、产气荚膜梭的分离培养(GB标准)
1号染色体开放阅读框122抗体Human PLCγ2(Phospholipase C Gamma 2, Phosphatidylinositol Specific) ELISA KitL-谷氨酸
1号染色体开放阅读框123抗体Human PKR1(Prokineticin Receptor 1) ELISA Kit5-胞苷三磷酸三钠盐
1号染色体开放阅读框124抗体Human PFKP(Phosphofructokinase, Plaet) ELISA Kit茜素黄R钠盐
2号染色体开放阅读框3抗体Human PGAM1(PhosphoglyceRate Mutase 1) ELISA Kit碱蓝6B
1号染色体开放阅读框127抗体Human PKR2(Prokineticin Receptor 2) ELISA Kit氯代十六烷
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