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溶酶体蓝色荧光探针
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:溶酶体蓝色荧光探针
英文名称:LysoBlue
产品规格:200μL
发货周期:1~3天
溶酶体蓝色荧光探针LysoBlue探针是荧光素pH 指示探针,可以用来区分酸性细胞器,使得动态研究活细胞内溶酶体生物合成和功能成为可能。LysoView 染料是在酸性细胞器内富集,可导致其质子化。而质子化可以减少染料的侧链上弱碱,减少荧光淬灭,使得生产的荧光强度增加。因此,LysoBlue 试剂表现出pH 依赖性,在酸化条件下,荧光强度增加。
这些探针可以单独或者组合使用,检测酸化的溶酶体和细胞内溶酶体的功能改变。例如,在某些肿瘤细胞的溶酶体具有较低的pH 值,而有的肿瘤细胞则相反。此外,一些细胞的细胞器酸化缺陷表现为囊性纤维化和其他病症。LysoBlue 探针在此类应用上非常广泛有意义。
浓度:1 mM in DMSO
储存:-20℃,避光,有效期6个月。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
二四氨钯 Pd ≥43.0%犬血管紧张素转化酶(ACE)免疫试剂盒肝配蛋白A1受体抗体Nestin 巢蛋白/神经上皮干蛋白抗体
2-氨-3-吡啶 95%犬血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)免疫试剂盒真核翻译起始因子2C2抗体NESG1/CCDC19 鼻咽上皮特异性蛋白1抗体
4-氨-3-羟 98%犬血管紧张素1⁻⁷(Ang1⁻⁷)免疫试剂盒眼睛发育缺失蛋白EYA2抗体Nesfatin-1/Nucb2 新的饱食分子蛋白抗体
4-氨-3-氟吡啶 97%犬胸腺肽α1(Thymosin α1)免疫试剂盒EYA4蛋白抗体Neprilysin 2 脑啡肽酶2抗体
5-溴-2-嘧啶 97%犬胸腺质淋巴生成素(TSLP)免疫试剂盒血清反应因子辅助蛋白1抗体Nephrin 肾小球粘附分子受体抗体
2--6-氟 98%犬胸腺活化调节趋化因子(TARC/CCL17)免疫试剂盒吞噬运动蛋白2抗体NEK9 丝氨/苏氨蛋白激酶NEK9抗体
5-(三氟)-2-吡啶 97%犬心型脂肪结合蛋白(h-FABP)免疫试剂盒红膜条带4.1蛋白抗体NEK8 丝氨/苏氨蛋白激酶NEK8抗体
2,3,4,5,6-五氟 97%犬心肌特异性肌钙蛋白T(c)免疫试剂盒化红生成素受体抗体NEK7 丝氨/苏氨蛋白激酶Nek7抗体
硫化铵溶液 AR,20% in H2O犬心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)免疫试剂盒转录调节因子E2F7抗体NEK6 高度相似的周期蛋白激酶NEK6抗体
铂 六水合物 AR,Pt ≥37.5%犬纤溶酶原激活物抑制剂1(SERPINE1)免疫试剂盒胶质谷氨运载蛋白4抗体NEK3 丝氨/苏氨蛋白激酶Nek3抗体
金 48~50% Au basis犬细小病(PV)抗体(IgG)免疫试剂盒erbB3结合蛋白1抗体NEK2 中心体相关蛋白激酶Nek2抗体
化金(III) 水合物 Au ≥48%犬间粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫试剂盒烯酰辅酶A水合酶1抗体NEK1 丝氨/苏氨蛋白激酶NEK1抗体
金丝/金粉 99.95%犬维生素K1(VK1)免疫试剂盒烯酰辅酶A水合酶含结构域蛋白2抗体NEGR1 神经生长调节蛋白1抗体
金丝/金粉 99.999%犬维生素E(VE)免疫试剂盒肿瘤坏死因子受体超家族成员EDAR抗体NEEP21 NEEP21蛋白抗体
金丝/金粉 99.99%犬维生素A(VA)免疫试剂盒自身抗原EDC4抗体NEDD8 泛素样蛋白NEDD8抗体
溶酶体蓝色荧光探针20号染色体开放阅读框177抗体Human TALLA-1(T-cell acute lymphoblastic leukemia antigen) ELISA Kit人扩张性共济失调突变基因(ATM)ELISA试剂盒,
CD244抗体Human TBX2(T-Box Protein 2) ELISA Kit人chemerin ELISA试剂盒,
巨噬炎性蛋白1α抗体Human TA(Anti-Teichoic Acid Antibody) ELISA Kit小鼠胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒,
巨噬炎性蛋白19抗体Human SYK(Spleen Tyrosine Kinase) ELISA Kit小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA试剂盒,
色素P450 3A4抗体Human TAB(Thyroxine Antibody) ELISA Kit大鼠糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒,
角蛋白6抗体Human SPTAN1(Alpha-Fodrin) ELISA Kit猪热休克蛋白70(HSP⁻⁷0)ELISA试剂盒,
角蛋白7抗体Human SLC16A8(Solute Carrier Family 16, Member 8) ELISA Kit兔子B瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒,
磷酸化角蛋白17抗体Human SELL(L-Selectin) ELISA Kit产培养基
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