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线粒体绿色荧光探针
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:线粒体绿色荧光探针
英文名称:Mitochondria Tracker Green
产品规格:50μg
发货周期:1~3天
本探针一种线粒体绿色荧光探针,可以用于活细胞线粒体特异性荧光染色。
本探针为采用Molecular Probes公司的carbocyanine进行了荧光标记的一种Mito-Tracker,分子量为671.88,可以用作线粒体特异性的荧光探针。和rhodamine 123或JC-1相比,本探针对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。
本探针可以用于对活细胞的染色,但染色后如果固定会导致染色消退。本探针呈绿色荧光,检测时的大激发波长为490nm,大发射波长为516nm。按终工作浓度为20-200nM计算,可以配制约370-3700ml 本探针工作液。
储存条件:-20℃避光,有效期半年。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
2-溴吡啶-3- 95%人β-肌动蛋白(β-actin)免疫试剂盒双特异性蛋白酶6/丝裂原活化蛋白激酶酶3抗体PCB 酮羧化酶抗体
5-溴-2--3-硝吡啶 98%人β-黑色素激素(β-MSH)免疫试剂盒脂蛋白受体Dab1抗体PCANAP2/Prostein 列腺癌相关蛋白2抗体
3-溴-2-吡啶 98%人β甘露糖苷酶(β Manase)免疫试剂盒化脂蛋白受体Dab1抗体P-cadherin P-钙粘附分子抗体
2--3--5-溴吡啶 98%人β-防御素3 免疫试剂盒同源转录因子DLX2抗体PBR/DBI/TSPO 外周二氮受体抗体
2-溴-5-吡啶 98%人β-防御素2 免疫试剂盒桥粒糖蛋白2/桥粒糖蛋白3抗体PBOV1 列腺癌和癌高表达蛋白抗体
4-溴-2-吡啶 97%人β防御素104(DEFB104A)免疫试剂盒桥粒糖蛋白1抗体PBLD/MAWBP MAWD结合蛋白抗体
3-溴-5-氟吡啶 97%人β-防御素1(DEFB1)免疫试剂盒肌动蛋白解聚因子19抗体PBK/TOPK PDZ连接激酶/T-LAK源蛋白激酶抗体
2-溴-5-羟吡啶 96%人β淀粉状蛋白A4 免疫试剂盒动力蛋白激活蛋白1抗体PBEF1(CT) 内脂素/内脏脂肪素(C端抗体)
3-溴-2-羟吡啶 97%人β-淀粉样体蛋白(β-APP)免疫试剂盒桥粒芯糖蛋白1PBEF(NT) 内脂素/内脏脂肪素抗体(N端)
3-溴-5-羟吡啶 97%人β淀粉样多肽42(Aβ 42)免疫试剂盒胞浆动力蛋白轻链1抗体PBEF (CT) 内脂素/B克隆增强因子-2(C端抗体)
4-肼盐盐 97%人β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)免疫试剂盒背根神经节同源蛋白DRGX抗体Paxillin 桩蛋白Paxillin抗体
5--2-氧 97%人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)免疫试剂盒DeltaD抗体PAX9 配对盒因9抗体
2--4-茴香 95%人β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)免疫试剂盒神经特异性转录因子DAT1抗体PAX8 配对盒因8抗体
2--4-(三氟) 96%人β半糖苷酶(βGAL)免疫试剂盒对接蛋白3抗体PAX7 配对盒因7抗体
6-吡啶-3- 97%人β氨己糖苷酶A(β-Hex A)免疫试剂盒DCN1样蛋白2抗体PAX6 转录因子Pax6抗体
线粒体绿色荧光探针钙平衡调节蛋白1抗体Human ITGA1/CD49a(Integrin alpha-1) ELISA Kit小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒,
阿尔茨海默病淀粉样蛋白相关胶原蛋白抗体Human NKp44/NCR2(Natural cytotoxicity triggering receptor 2) ELISA Kit小鼠凝血因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-Ag)ELISA试剂盒,
老年痴呆相关类钙粘蛋白CS1抗体Human NKp46/NCR1(Natural cytotoxicity triggering receptor 1) ELISA Kit大鼠骨碱性磷酸酶(BALP)ELISA试剂盒,
凋亡诱导蛋白NALP3抗体Human Cavin 1(Polymerase I and transcript release factor) ELISA Kit大鼠纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA试剂盒,
猪圆环病Ⅱ型衣壳蛋白抗体Human NKp30/NCR3(Natural cytotoxicity triggering receptor 3) ELISA Kit猪地塞米松(Dex)ELISA试剂盒,
血管加压素激活钙启动受体蛋白1抗体Human INT8(IntegRator complex subunit 8) ELISA Kit猪磷酸化外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒,
干生长因子受体/表面分化抗原抗体Human CAMP(Cathelicidin Antimicrobial Peptide) ELISA Kit组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒--动物,人
氯离子通道蛋白6抗体Human INT6(IntegRator complex subunit 6) ELISA Kit胃抑素(GIP)ELISA试剂盒--动物,人
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