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细胞膜绿色荧光探针(DiO)
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详细内容
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中文名称:细胞膜绿色荧光探针(DiO)
英文名称:DiOC18(3)
产品规格:10mg
发货周期:1~3天
本探针是常用的细胞膜荧光探针之一,呈现绿色荧光。DiO是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。DiO在进入细胞膜之荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光,DiO和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中,大激发波长为484nm,大发射波长为501nm。
CAS:34215-57-1
分子式:C53H85ClN2O6
分子量:881.72
DiO可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF,溶解度约为1-2.5mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。
DiO被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。DiO通常不会明显影响细胞的生存力(viability)。DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI,有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。
DiO除了简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
用于细胞膜荧光标记时,DiO的常用浓度为1-30μM,常用的浓度为5-10μM。DiO可以直接染色活的细胞或组织,染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织,通常宜使用配制在PBS中的4%多聚进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
注意事项:荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
储存条件:4℃避光,有效期一年。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
肉桂 98%人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)免疫试剂盒多巴受体D2抗体PCMT1 天门冬氨转移酶PCMT抗体
3,5-二氧肉桂,主要为反式 99%人白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)免疫试剂盒多巴受体D1抗体PCK2 羧化酶2抗体
2,6-二肉桂 96%人白介素1β转换酶(ICE)免疫试剂盒多巴受体相互作用蛋白1抗体PCK1 烯酮羧激酶抗体
3,3-二-1- 98%人白介素-1β体(Pro-IL-1β)免疫试剂盒凋亡相关蛋白激酶1抗体P-CK/Cytokeratin AE1 + AE3 广谱角蛋白PCK抗体
醋去氢表雄酮 98%人白介素1β体(pro-IL1B)免疫试剂盒凋亡相关蛋白激酶2抗体PCID2 PCID2蛋白抗体
乙地塞米松 98%人白介素1β(IL-1β)免疫试剂盒多巴、cAMP调节蛋白抗体PCID1 PCID1蛋白抗体
3,4-二氧肉桂 97%人白介素1α(IL-1α)免疫试剂盒化多巴/cAMP调节神经蛋白抗体PCGF3/RNF3 环指蛋白3抗体
4-(二氨)肉桂 98%人白介素19(IL-19)免疫试剂盒化多巴/cAMP调节蛋白抗体PCGF1 表观抑制因子Polycomb家族成员PCGFl蛋白抗体
3,3-二 99%人白介素18结合蛋白(IL-18BP)免疫试剂盒化双皮质素抗体PCGF1 表观抑制因子Polycomb家族成员PCGFl蛋白抗体
癸乙酯 99%人白介素18(IL-18)免疫试剂盒化Disabled 1抗体PCDHGC5 原钙粘蛋白γC5抗体
雌二 98%人白介素17F(IL-17F)免疫试剂盒化Disabled 1抗体PCDHGC4 原钙粘蛋白γC4抗体
反式-4-氧肉桂异辛酯 98%人白介素17B(IL17B)免疫试剂盒化Disabled 1抗体PCDHGC3/PCDH2 原钙粘蛋白γC3抗体
对氟肉桂酰 97%人白介素17A(IL-17A)免疫试剂盒双皮质素抗体PCDHGB6 原钙粘蛋白γB6抗体
香叶 95%人白介素16(IL-16)免疫试剂盒D酪氨激酶衰减蛋白2抗体PCDHGB5 原钙粘蛋白γB5抗体
醋 98%人白介素15(IL-15)免疫试剂盒化D酪氨激酶衰减蛋白2抗体PCDHGB4 原钙粘蛋白γB4抗体
细胞膜绿色荧光探针(DiO)凋亡抑制因子2抗体Human ICAM 5(Intercellular Adhesion Molecule 5) ELISA Kit黄杞苷 Aesculetin
促肾上腺皮质释放结合蛋白抗体Human Spexin ELISA Kit邻-β-D-吡喃葡萄糖苷
3号染色体开放阅读框23抗体Human UNC5B(Netrin Receptor UNC5B) ELISA Kit对-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷
瓜氨酸环肽抗体Human IRS1(Insulin Receptor SubstRate 1) ELISA Kit盐酸林可霉素
分裂核仁蛋白1抗体Human CXCR2(C-X-C chemokine receptor type 2) ELISA Kit人超敏游离雌三醇(uE3)ELISA试剂盒,uE3 ELISA
钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4抗体Human CEBPZ(CCAAT/enhancer binding protein zeta) ELISA Kit人缺血修饰白蛋白(IMA)ELISA试剂盒,
磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶4抗体Human PAP(Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit人假定蛋白LOC433328 ELISA试剂盒,
胶原蛋白4a2亚基抗体Human AURKA(Aurora kinase A) ELISA Kit小鼠Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
热门标签:细胞膜绿色荧光探针,DiO













