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溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒
英文名称:Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit
产品规格:>100次
发货周期:1~3天
本试剂盒是一种对溶酶体中酸性β-半乳糖苷酶进行染色检测的试剂盒,常用作细胞衰老检测时的对照。在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织中溶酶体酸性β-半乳糖苷酶的活力水平情况。本试剂盒可以用于培养细胞的检测,也可以用于组织切片的检测。
试剂盒组分:
β-半乳糖苷酶染色固定液—————100ml
X-Gal溶液————————————5ml
β-半乳糖苷酶染色液A——————1ml
β-半乳糖苷酶染色液B——————1ml
β-半乳糖苷酶染色液C——————100ml
绝大多数正常细胞都可以检测到较高水平的溶酶体β-半乳糖苷酶活性水平。可以用作细胞衰老β-半乳糖苷酶染色时的参考染色。细胞衰老特异的β-半乳糖苷酶仅在衰老时表达,而溶酶体β-半乳糖苷酶几乎在任何情况下都表达。
本试剂盒仅染色溶酶体酸性β-半乳糖苷酶,不会染色衰老特异性的β-半乳糖苷酶,也不会染色外源转染表达的用于报告基因的β-半乳糖苷酶(的β-半乳糖苷酶)。
如果使用6孔板检测,足够测定100个样品;使用24孔板测定,足够测定400个样品;使用96孔板测定,足够测定1000个样品。对于组织切片或组织块,可以检测的样品数量视样品的大小而定。对于普通的切片也至少足够检测100个样品。
储存条件:-20℃,有效期一年。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
3,4-二 98%人白介素4受体(IL4R/CD124)免疫试剂盒DYX1C1蛋白抗体PDHA1/PDH-E1α 酮脱氢酶α1抗体
7-氨头孢霉烷 98%人白介素4(IL-4)免疫试剂盒E3泛素蛋白连接酶dzip3抗体PDGFRL 血小板源性生长因子受体β样蛋白抗体
6-氨青霉烷 98%人白介素37(IL-37)免疫试剂盒三腺苷依赖解旋酶DDX23抗体PDGFRA 血小板源性生长因子受体A抗体(PDGFRα)
肉桂苄酯 98%人白介素35(IL-35)免疫试剂盒多能发育相关因5抗体PDGFC/VEGF E 血小板源性生长因子C抗体
反式2-溴肉桂 98%人白介素33(IL-33)免疫试剂盒三腺苷依赖解旋酶DDX3抗体PDGF-BB 血小板源性生长因子-BB抗体
α-溴肉桂 98%人白介素32(IL-32)免疫试剂盒化三腺苷依赖解旋酶DDX3抗体PDGF-B 血小板源性生长因子-B抗体
4-溴代乙烯, 包含100 - 500 ppm 4-叔丁邻二酚阻聚剂, 95%人白介素31(IL-31)免疫试剂盒迪格弗-梅尔奥尔-克劳森综合征相关蛋白抗体PDGF-A 血小板源性生长因子-A抗体
3-溴-4-羟 97%人白介素3(IL-3)免疫试剂盒双氧化酶激活因子2抗体PDGF Receptor beta/PDGFRB 血小板源性生长因子受体B抗体(PDGFRβ)
4-溴-2-氟肉桂 98%人白介素2诱导的T激酶(ITK)免疫试剂盒RNA结合泛素连接酶DZIP3抗体PDGF AB+BB 血小板源性生长因子AB+BB抗体
2-溴乙烯 97%,含0.1%对叔丁邻二酚(TBC)稳定剂人白介素2受体(IL2R)免疫试剂盒二氢二脱氢酶1/2抗体PDEF/SPDEF 上皮特异性ETs转录因子抗体
4-羟酯 99%人白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ)免疫试剂盒形态发生紊乱关联激活因子2抗体PDE5A 二酯酶5A抗体
4-溴丁酰 95%人白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)免疫试剂盒质分裂付出蛋白2抗体PDE4D 二酯酶4D抗体
4-溴肉桂 98%人白介素29(IL-29)免疫试剂盒质分裂付出蛋白4抗体PDE4A8 二酯酶4A8抗体
4-肉桂 99%人白介素28B(IL-28B)免疫试剂盒质分裂付出蛋白5抗体PDE4A 二酯酶4A抗体
肉桂酰 97%人白介素28A(IL-28A/IFN-λ2)免疫试剂盒淋巴抗原75抗体PDCD7 凋亡相关蛋白7抗体
溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒中心体肌动蛋白γ1/增强型PI3K蛋白抗体Human CPN2(Carboxypeptidase N2) ELISA Kit小鼠Ⅰ型胶原C末端肽(CⅠCP)ELISA试剂盒,
分裂周期相关蛋白JPO2抗体Human CDKN1B(Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 1B) ELISA Kit大鼠吡啶酚(PYD)ELISA试剂盒,
半胱酸蛋白酶-2抗体Human IL-17 F(Interleukin 17F) ELISA Kit大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒,
7号染色体开放阅读框63抗体Human Cr(Creatinine) ELISA Kit因子ELISA试剂盒--动物,人
CD2结合蛋白3抗体Human TITF1(thyroid transcription factor 1) ELISA Kit髓鞘碱性蛋白抗体(MBP)ELISA试剂盒--动物,人
胶原三股螺旋重复蛋白1抗体Human α-Endorphin(alpha Endorphin) ELISA Kit肺癌标志物ELISA试剂盒--动物,人
20号染色体开放阅读框72抗体Human TCEB2(Transcription elongation factor B polypeptide 2) ELISA Kit抗副流感病IgM抗体(anti-PIV IgM)ELISA试剂盒--动物,人
2号染色体开放阅读框6抗体Human ACY1(aminoacylase-1) ELISA Kit抗丁型肝炎病抗体(anti-HDV)ELISA试剂盒--动物,人
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