测定意义:CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。测定原理:H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
试验中所需的仪器和试剂:紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
产品说明: CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是主要的 H2O2清除酶,在活性氧清除系 统中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能够分解 H2O2,使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降,根 据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 1、细菌、细胞或组织样本的制备 a、细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4个):提取液 体积(mL)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(功率 20% 或 200w,超声 3 ,间隔 10 ,重复 30 次);8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。 b、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提 取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样本:直接检测。