ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中，尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱 羧的可逆反应，产生丙酮酸和CO2，以及伴随NAD(P)+的还原反应，是苹果酸代谢的关键酶。ME活性与生物合成 和抗氧化密切相关。近年来植物ME活性测定较多，已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶性和对底物特异性 的不同，可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME催化NADP +还原成NADPH，在340nm下测定NADPH增加速率。

需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。

NADP-ME 活性计算 1、组织中NADP-ME活力的计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH定义为个酶活力单位。 NADP-ME（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V样) ÷T=4823×ΔA÷Cpr （2）按样本质量计算： 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH定义为个酶活力单位。 NADP-ME（U/g 质量）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷(V样÷V样总×W) ÷T =4823×ΔA÷W 2、细菌或细胞中NADP-ME活力的计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH定义为个酶活力单位。 NADP-ME（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V样) ÷T=4823×ΔA÷Cpr （2）按细菌或细胞数量计算： 单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH定义为个酶活力单位。 NADP-ME（U/10 4 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷(V样÷V样总×500) ÷T=9.65×ΔA 3、血清中NADP-ME活力的计算： 单位的定义：每mL血清在反应体系中每分钟生成1nmol NADPH定义为个酶活力单位。 NADP-ME（U/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷V样÷T=4823×ΔA V反总：反应体系总体积，9×10 -4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；10 9：单位换算系数，1mol=10 9nmol。



注意事项：
1、 若 A2-A1 大于 0.5，需将样本用提取液稀释，使 A2-A1 小于 0.5，可提高检测灵敏度。


2、 实验时，试剂三、试剂四和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂 37℃或 25℃水浴放置。

3、 比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，取小烧杯只装入定量的 37℃或 25℃蒸馏水，将此烧杯放 入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

4、 好两个人同时做此实验，个人比色，个人计时，以保证实验结果的准确性。

5、 如果ΔA＜0.01，可将反应时间延长到 5