溶液的配制： 1．试剂：用时加入 50 mL 提取液溶解；
2．试剂二：用时每支加 275 μL 双蒸水充分溶解备用；
3．试剂三：用时每支加 275 μL 双蒸水充分溶解备用；
4．工作液配制：将试剂、试剂二、试剂三按 85：1：1 的比例混合，现用现配。


产品说明： ICDHc（EC 1.1.1.42）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成α-酮戊二酸， 同时还原 NADP +生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又种 NADPH 重要来源，在逆境中该酶 活性通常会发生显著变化。 利用 ICDHc 催化 NADP +还原成 NADPH 反应，在 340nm 下测定 NADPH 浓度的增加，即可反映 ICDHc 活性。 注意：实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。


ICDHc 活力单位的计算
1、血清（浆）ICDHc 活力的计算 单位的定义：每 mL 血清（浆）在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为个酶活力单位。 ICDHc（U/mL）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷V 样本÷T=1608×ΔA

2、组织中 ICDHc 活力的计算 （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为个酶活力单位。 ICDHc（U/mg prot）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(V 样本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr （2）按样本质量计算： 单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为个酶活力单位。 ICDHc（U/g 质量）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=1608×ΔA÷W

3、细菌或培养细胞中 ICDHc 活力的计算 （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1nmol NADPH 定义为个酶活力单位。 ICDHc（U/mg prot）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(V 样本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr （2）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成 1nmol 的 NADPH 定义为个酶活力单位。 ICDHc（U/10 4 Cell）=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10 9]÷(V 样本×500)÷T=3.2×ΔA V 反总：反应总体积，0.001L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10 3L/moL/cm；d：石英比色皿光径，1cm； V 样本：加入样本体积，0.05mL；V 提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量， g；T：反应时间，2min；500：细菌或细胞密度，500 万/mL。