测定意义:G6PDH广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键酶,催化 6-磷酸葡萄糖氧化为 6 -磷酸葡萄糖酸内酯,同时将NADP+还原为NADPH,供生物合成及维持细胞内的还原状态用。因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。
测定原理:G6PDH催化NADP+还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH增加速率。
试验中所需的
仪器和试剂:紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
产品说明: G6PDH(EC 1.1.1.49)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是磷酸戊糖途径的关键酶,催化 6-磷 酸葡萄糖氧化为 6-磷酸葡萄糖酸内酯,同时将 NADP +还原为 NADPH,供生物合成及维持细胞内的还原状态用。 因此 6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。 G6PDH 催化 NADP +还原生成 NADPH,在 340nm 下测定 NADPH 增加速率。
注意:实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 需自备的
仪器和用品: 紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
样本处理
1、细菌、细胞或组织样本的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声 波破碎细菌或细胞(功率 20%超声 3s,间隔 10s,重复 30 次)。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样本:直接检测。