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克必隆常态转化液20 次
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更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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吴*
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相关标签：克隆及表达
详细内容
克必隆常态转化液20 次产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
克必隆常态转化液20 次使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-克必隆常态转化液20 次15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
大鼠Ⅳ型胶原α1(COL4α1)elisa试剂盒，英文名：COL4α1 ELISA Kit
大鼠Ⅳ型胶原(COL4)ELISA试剂盒，英文名：COL4 ELISA Kit
大鼠Ⅲ型前胶原氨基端原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒，英文名：PⅢNP ELISA Kit
大鼠Ⅲ型前胶原(PCⅢ)ELISA试剂盒，英文名：PCⅢ ELISA Kit
大鼠Ⅲ型胶原交联羧基端肽(CTXⅢ)ELISA试剂盒，英文名：CTXⅢ ELISA Kit
大鼠Ⅲ型胶原α1(COL3α1)ELISA试剂盒，英文名：COL3α1 ELISA Kit
大鼠Ⅲ型胶原(COL3)ELISA试剂盒，英文名：COL3 ELISA Kit
大鼠Ⅱ型前胶原羧基端原肽(PⅡCP)ELISA试剂盒，英文名：PⅡCP ELISA Kit
大鼠Ⅱ型前胶原氨基端原肽(PⅡNT)ELISA试剂盒，英文名：PⅡNT ELISA Kit
大鼠Ⅱ型胶原交联羧基端肽(CTXⅡ)ELISA试剂盒，英文名：CTXⅡ ELISA Kit
大鼠Ⅱ型胶原α1(COL2α1)ELISA试剂盒，英文名：COL2α1 ELISA Kit
大鼠Ⅱ型胶原(COL2)ELISA试剂盒，英文名：COL2 ELISA Kit
大鼠ⅡD组磷脂酶A2(PLA2G2D)ELISA试剂盒，英文名：PLA2G2D ELISA Kit
大鼠ⅡA组磷脂酶A2(PLA2G2A)ELISA试剂盒，英文名：PLA2G2A ELISA Kit
大鼠Ⅰ型前胶原羧基端原肽(PⅠCP)ELISA试剂盒，英文名：PⅠCP ELISA Kit
大鼠Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)ELISA试剂盒，英文名：PⅠNP ELISA Kit
大鼠Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)ELISA试剂盒，英文名：CTXⅠ ELISA Kit
大鼠Ⅰ型胶原交联氨基端肽(NTXⅠ)ELISA试剂盒，英文名：NTXⅠ ELISA Kit
大鼠Ⅰ型胶原α2(COL1α2)ELISA试剂盒，英文名：COL1α2 ELISA Kit
大鼠Ⅰ型胶原α1(COL1α1)ELISA试剂盒，英文名：COL1α1 ELISA Kit
大鼠Ⅰ型胶原(COL1)ELISA试剂盒，英文名：COL1 ELISA Kit
大鼠90kDa热休克蛋白β1(HSP90β1)ELISA试剂盒，英文名：HSP90β1 ELISA Kit
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大鼠5-羟色胺受体2C(HTR2C)ELISA试剂盒，英文名：HTR2C ELISA Kit
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克必隆常态转化液20 次大鼠17-羟孕酮(17-OHP)ELISA试剂盒，英文名：17-OHP ELISA Kit
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大鼠10kDa干扰素γ诱导蛋白(IP10)ELISA试剂盒，英文名：IP10 ELISA Kit
大鼠1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)ELISA试剂盒，英文名：1,5-AG ELISA Kit
大鼠1,3-二磷酸甘油酸(1,3-BPG)ELISA试剂盒，英文名：1,3-BPG ELISA Kit
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二级目录：豚鼠ELISA试剂盒二级目录：豚鼠ELISA试剂盒二级目录：豚鼠ELISA试剂盒
豚鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒，英文名：HIS ELISA Kit
豚鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒，英文名：TGF-β1 ELISA Kit
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豚鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒，英文名：TNF-α ELISA Kit
豚鼠孕激素(progestogen)ELISA试剂盒，英文名：progestogen ELISA Kit
豚鼠乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)ELISA试剂盒，英文名：HBsAg ELISA Kit
克隆及表达
