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LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL
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更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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吴*
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相关标签：克隆及表达
详细内容
LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA KitMouse bone morphogenetic proteins,BMPs ELISA Kit
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小鼠骨特性碱性磷酸酶(BALP)ELISA KitMouse Bone-specific alkaline phosphatase,BALP ELISA kit
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小鼠谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)ELISA KitMouse glutathione peroxidase,GSH-Px ELISA Kit
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LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL小鼠钙结合蛋白(CR)ELISA KitMouse Calretinin,CR ELISA Kit
小鼠钙非依赖型磷脂酶A2(iPLA2)ELISA KitMouse Calcium-independent phospholipase A2,iPLA2 ELISA kit
小鼠钙调素(CAM)ELISA KitMouse calmodulin,CAM ELISA Kit
小鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)ELISA KitMouse secreted phospholipase A2,sPLA2 ELISA Kit
小鼠肺炎支原体(MP)抗体(IgG)ELISA KitMouse mycoplasma pneumoniae(MP)antibody(IgG)ELISA kit
小鼠肺部活化调节趋化因子(PARC/CCL18)ELISA KitMouse pulmonary activation regulated chemokine,PARC ELISA Kit
小鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA KitMouse Pulmonary Surfactant-associated protein C,SP-C ELISA kit
小鼠肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA KitMouse Pulmonary Surfactant-associated protein B,SP-B ELISA kit
小鼠肺表面活性蛋白D(SP-D)ELISA KitMouse pulmonary surfactant-associated protein D,SP-D ELISA kit
小鼠肥大细胞类胰蛋白酶(MCT)ELISA KitMouse Mast Cell Tryptase,MCT ELISA Kit
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小鼠芳香酶(ARO)ELISA KitMouse Aromatase,ARO ELISA Kit
小鼠二酰基甘油(DAG/DG)ELISA KitMouse diacyl glycerol,DAG/DG ELISA Kit
小鼠二铵氧化酶(DAO)ELISA KitMouse diamine oxidase,DAO ELISA Kit
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小鼠多肽YY(PYY)ELISA KitMouse Peptide YY,PYY ELISA kit
小鼠多巴铵D1受体(D1R)ELISA KitMouse Dopamine D1 receptor,D1R ELISA Kit
小鼠端粒酶(TE)ELISA KitMouse telomerase,TE ELISA Kit
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小鼠毒蕈硷乙酰胆碱受体M2(CHRM2)ELISA KitMouse Muscarinic acetylcholine receptor M2,CHRM2 ELISA kit
小鼠凋亡诱导因子(AIF)ELISA KitMouse apoptosis inducing factor,AIF ELISA Kit
小鼠凋亡相关因子配体(FASL)ELISA KitMouse Factor-related Apoptosis ligand,FASL ELISA Kit
小鼠低密度脂蛋白(LDL)ELISA KitMouse low density lipoprotein,LDL ELISA Kit
小鼠牛血清白蛋白残留检测ELISA KitMouse rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit
小鼠蛋白聚糖4(PRG4)ELISA KitMouse proteoglycan 4,PRG4 ELISA Kit
小鼠胆碱乙酰转移酶(ChAT)ELISA KitMouse choline acetyltransterase,ChAT ELISA Kit
小鼠胆固醇(CH)ELISA KitMouse cholesterol,CH ELISA Kit
小鼠单克隆抗体亚型鉴定ELISA KitMouse monoclonal antibody isotyping ELISA kit
克隆及表达
