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通用 miRNA 克隆接头0.83nmol
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
商家名片
吴*
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相关标签：克隆及表达
详细内容
通用 miRNA 克隆接头0.83nmol运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需通用 miRNA 克隆接头0.83nmol根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
通用 miRNA 克隆接头0.83nmol产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
豚鼠乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)elisa试剂盒，英文名：HBsAb ELISA Kit
豚鼠一氧化氮(NO)ELISA试剂盒，英文名：NO ELISA Kit
豚鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒，英文名：CH50 ELISA Kit
豚鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒，英文名：SAA ELISA Kit
豚鼠血管紧张素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA试剂盒，英文名：ANG-Ⅱ ELISA Kit
豚鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒，英文名：PAP ELISA Kit
豚鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒，英文名：AGEs ELISA Kit
豚鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒，英文名：ECP ELISA Kit
豚鼠生长激素(GH)ELISA试剂盒，英文名：GH ELISA Kit
豚鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒，英文名：Renin ELISA Kit
豚鼠神经蛋白聚糖(NCAN)ELISA试剂盒，英文名：NCAN ELISA Kit
豚鼠前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒，英文名：PGE2 ELISA Kit
豚鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒，英文名：Cortisol ELISA Kit
豚鼠内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒，英文名：eNOS ELISA Kit
豚鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒，英文名：ET-1 ELISA Kit
豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒，英文名：IgG ELISA Kit
豚鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒，英文名：IgE ELISA Kit
豚鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒，英文名：IgA ELISA Kit
豚鼠卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)ELISA试剂盒，英文名：OVA sIgG ELISA Kit
豚鼠卵清蛋白特异性IgE(OVA sIgE)ELISA试剂盒，英文名：OVA sIgE ELISA Kit
豚鼠抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)ELISA试剂盒，英文名：ADH/VP/AVP ELISA Kit
豚鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒，英文名：MIF ELISA Kit
豚鼠巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒，英文名：M-CSF ELISA Kit
豚鼠降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒，英文名：CGRP ELISA Kit
豚鼠基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒，英文名：TIMP-1 ELISA Kit
豚鼠基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒，英文名：MMP-9 ELISA Kit
豚鼠黄体激素(LH)ELISA试剂盒，英文名：LH ELISA Kit
豚鼠环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒，英文名：cAMP ELISA Kit
豚鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒，英文名：cGMP ELISA Kit
豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒，英文名：LPO ELISA Kit
豚鼠钩端螺旋体IgG(Leptospira)ELISA试剂盒，英文名：Leptospira ELISA Kit
豚鼠钩端螺旋体IgG(Lebtospira)ELISA试剂盒，英文名：Lebtospira ELISA Kit
豚鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒，英文名：SCF/MGF ELISA Kit
豚鼠肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒，英文名：HGF ELISA Kit
豚鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA试剂盒，英文名：GAPDH ELISA Kit
豚鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒，英文名：CAM ELISA Kit
豚鼠端粒酶(TE)ELISA试剂盒，英文名：TE ELISA Kit
豚鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒，英文名：CCK ELISA Kit
豚鼠胆碱脂酶(CHE)ELISA试剂盒，英文名：CHE ELISA Kit
豚鼠单核细胞趋化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA试剂盒，英文名：MCP-4/CCL13 ELISA Kit
豚鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒，英文名：MCP-1/CCL2/MCAF ELISA Kit
豚鼠单胺氧化酶(MAO)ELISA试剂盒，英文名：MAO ELISA Kit
豚鼠催产素(OT)ELISA试剂盒，英文名：OT ELISA Kit
通用 miRNA 克隆接头0.83nmol豚鼠促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒，英文名：ACTH ELISA Kit
豚鼠促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒，英文名：FSH ELISA Kit
豚鼠雌激素(estrogen)ELISA试剂盒，英文名：estrogen ELISA Kit
豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒，英文名：SOD ELISA Kit
豚鼠肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒，英文名：iFABP ELISA Kit
豚鼠表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒，英文名：EGF ELISA Kit
豚鼠白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒，英文名：LTD4 ELISA Kit
豚鼠白三烯B4(LTB4)ELISA试剂盒，英文名：LTB4 ELISA Kit
克隆及表达
