联系我们
联系人：吴菲
产品展示
克必隆平末端克隆试剂盒（组成型）20 次
点击次数：146
价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
商家名片
吴*
联系我时，请说明是阿仪网看到的，谢谢!
- 电话: 02*******773
- 手机: 18******584
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
相关标签：克隆及表达
详细内容
克必隆平末端克隆试剂盒（组成型）20 次运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需克必隆平末端克隆试剂盒（组成型）20 次根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
克必隆平末端克隆试剂盒（组成型）20 次产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
猪转铁蛋白受体(TFR)ELISA KitPig transferrin receptor,TFR ELISA Kit
猪转铁蛋白(TF)ELISA KitPig Transferrin,TF ELISA Kit
猪转录因子1(AP-1)ELISA KitPig Transcription Factor/Activator Protein 1,AP-1 ELISA KIT
猪主要组织相容性复合体Ⅲ类(MHCⅢ)ELISA KitPorcine MHC Ⅲ ELISA Kit
猪主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ)ELISA KitPorcine MHC Ⅱ ELISA Kit
猪主要急性期蛋白(MAP)ELISA KitPig major acute phase protein,MAP ELISA Kit
猪中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA KitPig neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit
猪脂联素受体2(ADIPOR2)ELISA KitPig adiponectin receptor 2,ADIPOR2 ELISA kit
猪脂联素受体1(ADIPOR1)ELISA KitPig adiponectin receptor 1,ADIPOR1 ELISA kit
猪脂肪酸合成酶(FAS)ELISA KitPig fatty acid synthase,FAS ELISA kit
猪脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA KitPig lipolysaccharide binding protein,LBP ELISA Kit
猪脂蛋白脂酶(LPL)ELISA KitPig lipoprotein lipase,LPL ELISA kit
猪脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)ELISA KitPig lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2 ELISA Kit
猪正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA KitPig regulated on activation in normal T-cell expressed ａnd secreted,RANTES ELISA Kit
猪粘膜血管地址素细胞黏附分子1(MADCAM1)ELISA KitPig mucosal vascular addressin cell adhesion molecule 1,MADCAM1 ELISA kit
猪粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA KitPig mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA Kit
猪粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA KitPig mucin-5 subtype AC,MUC5AC ELISA Kit
猪粘蛋白/粘液素2(MUC2)ELISA KitPig Mucin-2,MUC2 ELISA Kit
猪粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA KitPig Mucin-1,MUC1 ELISA Kit
猪早老素2(PS-2)ELISA KitPig Presenilin 2,PS-2 ELISA Kit
猪早老素1(PS-1)ELISA KitPig Presenilin 1,PS-1 ELISA Kit
猪载脂蛋白E(Apo-E)ELISA KitPig apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit
猪载脂蛋白A5(apo-A5)ELISA KitPig Apolipoprotein A5,apo-A5 ELISA Kit
猪甾体合成急性调节蛋白(StAR)ELISA KitPig steroidacute regulatory protein,StAR ELISA kit
猪诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA KitPig inducible nitric oxide synthase,iNOS ELISA Kit
猪游离脂肪酸(FFA)ELISA KitPig free fatty acids,FFA ELISA Kit
猪游离三碘甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA KitPig free tri-iodothyronine indes,FT3 ELISA kit
猪游离甲状腺素(FT4)ELISA KitPig free thyroxine,FT4 ELISA kit
猪胰高血糖素样肽2(GLP2)ELISA KitPig glucagon like peptide 2,GLP2 ELISA kit
猪胰高血糖素样肽1(GLP1)ELISA KitPig glucagon like peptide 1,GLP1 ELISA Kit
克必隆平末端克隆试剂盒（组成型）20 次猪胰高血糖素(GC)ELISA KitPig Glucagon,GC ELISA Kit
猪胰淀粉酶α2(PAMY α2)ELISA KitPig Pancreatic Amylase α2,PAMY α2 ELISA Kit
猪胰岛素原(PI)ELISA KitPig Proinsulin,PI ELISA Kit
猪胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA KitPig insulin-like growth factors binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit
猪胰蛋白酶(Trypsin)ELISA KitPig Trypsin ELISA Kit
猪氧还原蛋白过氧化物酶2(PRDX2)ELISA KitPig peroxiredoxin 2,PRDX2 ELISA kit
猪血栓素A2(TXA2)ELISA KitPig Thromboxane A2,TXA2 ELISA Kit
猪血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA KitPig serum amyloid A,SAA ELISA Kit
猪血浆激肽释放酶(KLKB1)ELISA KitPig plasma kallikrein,KLKB1 ELISA Kit
猪血红蛋白(Hb)ELISA KitPig hemoglobin,Hb ELISA Kit
猪血管舒缓激肽(BK)ELISA KitPig Bradykinin,BK ELISA Kit
猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA KitPorcine Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit
克隆及表达
