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DNA 快速连接试剂盒30 次
点击次数：153
价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
商家名片
吴*
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相关标签：克隆及表达
详细内容
DNA 快速连接试剂盒30 次运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需DNA 快速连接试剂盒30 次根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)IgG抗体ELISA KitMouse keyhole limpet hemocyanin(KLH)IgG antibody ELISA Kit
小鼠幽门螺旋杆菌抗体(IgM)ELISA KitMouse Helicobacter pylori antibody(IgM)ELISA Kit
小鼠幽门螺旋杆菌抗体(IgG)ELISA KitMouse Helicobacter pylori antibody(IgG)ELISA Kit
小鼠印度刺猬因子(IHH)ELISA KitMouse Idian Hedgehog,IHH ELISA kit
小鼠吲哚铵2,3-双加氧酶1(IDO1)ELISA KitMouse Indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1 ELISA kit
小鼠音猬因子N端(Shh-N)ELISA KitMouse sonic hedgehog N-Terminus,Shh-N ELISA Kit
小鼠乙型肝炎核心抗体(HBcAb)ELISA KitMouse hepatitis B virus core antibody,HBcAb ELISA Kit
小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)ELISA KitMouse hepatitis B virus surface antigen,HBsAg ELISA Kit
小鼠乙型肝炎表面抗体(HBsAb)ELISA KitMouse hepatitis B virus surface antibody,HBsAb ELISA Kit
小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)ELISA KitMouse hepatitis B virus e antigen,HBeAg ELISA Kit
小鼠乙型肝炎e抗体(HBeAb)ELISA KitMouse hepatitis B virus e antibody,HBeAb ELISA Kit
小鼠乙酰辅酶A(acetyl-CoA)ELISA Kitmouse acetyl-CoA ELISA Kit
小鼠胰脂肪酶(PL)ELISA KitMouse Pancreatic Lipase,PL ELISA Kit
小鼠胰激肽原酶(PK)ELISA KitMouse pancreatic kininogenase,PK ELISA Kit
小鼠胰高血糖素样肽2(GLP-2)ELISA KitMouse glucagon-like peptide-2,GLP-2 ELISA Kit
小鼠胰高血糖素(GC)ELISA KitMouse Glucagon,GC ELISA Kit
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)ELISA KitMouse Insulin-like growth factor binding protein 6,IGFBP-6 ELISA kit
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA KitMouse Insulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP-4 ELISA kit
小鼠胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)ELISA KitMouse IGF-1R ELISA kit
小鼠胰岛素降解酶(IDE)ELISA KitMouse Insulin-degrading Enzyme,IDE ELISA Kit
小鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA KitMouse trypsinogen activation peptide,TAP ELISA Kit
DNA 快速连接试剂盒30 次小鼠胰蛋白酶1(trypsin-1)ELISA KitMouse trypsin-1 ELISA Kit
小鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA KitMouse trypsin ELISA Kit
小鼠胰α淀粉酶(AMY2A)ELISA KitMouse pancreatic alpha amylase,AMY2A ELISA kit
小鼠一氧化碳血红蛋白(HbCO)ELISA KitMouse Carboxyhemoglobin,HbCO ELISA Kit
小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)ELISA KitMouse oxidizided glutathione,GSSG ELISA Kit
小鼠氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)ELISA KitMouse oxidized high density lipoprotein,Ox-HDL ELISA Kit
小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA KitMouse oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit
小鼠烟酰铵腺嘌呤二核苷酸(NADH)ELISA KitMouse nicotinamide adenine dinucleotide,NADH ELISA Kit
小鼠牙本质基质蛋白1(DMP1)ELISA KitMouse Dentin Matrix Protein 1,DMP1 ELISA Kit
小鼠循环免疫复合物(CIC)ELISA KitMouse circulating immune complex,CIC ELISA Kit
小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA KitMouse Platelet Factor 4,PF-4 ELISA Kit
小鼠血小板衍生生长因子CC(PDGF-CC)ELISA KitMouse platelet-derived growth factor CC,PDGF-CC ELISA Kit
小鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA KitMouse platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB ELISA Kit
小鼠血小板衍生生长因子AA(PDGF-AA)ELISA KitMouse Platelet-Derived Growth Factor AA,PDGF-AA ELISA kit
小鼠血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA KitMouse Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit
小鼠血纤蛋白原γ链(FGG)ELISA KitMouse Fibrinogen Gamma Chain，FGG ELISA Kit
小鼠血纤蛋白(fibrin)ELISA KitMouse fibrin ELISA kit
小鼠血栓素A2(TXA2)ELISA KitMouse Thromboxane A2,TXA2 ELISA Kit
小鼠血清淀粉样蛋白A3(SAA3)ELISA KitMouse serum amyloid A-3 protein,SAA3 ELISA kit
小鼠血浆激肽释放酶(KLKB1)ELISA KitMouse plasma kallikrein,KLKB1 ELISA Kit
小鼠血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)ELISA KitMouse Angiopoietin-related protein 4,ANGPTL4 ELISA kit
小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA KitMouse Angiopoietin 4,ANG-4 ELISA Kit
小鼠血管生成素2(ANG-2)ELISA KitMouse Angiopoietin 2,ANG-2 ELISA Kit
小鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA KitMouse Angiopoietin 1,ANG-1 ELISA Kit
小鼠血管生长素(ANG)ELISA KitMouse Angiogenin,ANG ELISA Kit
小鼠血管内皮细胞生长因子受体3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA KitMouse Vascular endothelial cell growth factor receptor 3,VEGFR-3/Flt-4 ELISA kit
克隆及表达
