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裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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吴*
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相关标签：克隆及表达
详细内容
裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
犬透明质酸酶4(HAase 4)ELISA KitCanine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit
犬透明质酸酶3(HAase 3)ELISA KitCanine Hyaluronidase 3,HAase 3 ELISA Kit
犬透明质酸酶2(HAase 2)ELISA KitCanine Hyaluronidase 2,HAase 2 ELISA Kit
犬透明质酸酶1(HAase 1)ELISA KitCanine Hyaluronidase 1,HAase 1 ELISA Kit
犬透明质酸(HA)ELISA KitCanine Hyaluronic acid,HA ELISA Kit
犬特殊基团成分(维生素D结合蛋白)(GC)ELISA KitDog Vitamin D-binding protein,GC ELISA kit
犬髓过氧化物酶(MPO)ELISA KitDog Myeloperoxidase,MPO ELISA kit
犬松弛肽/松弛素(RLN)ELISA KitCanine Relaxin,RLN ELISA Kit
犬水通道蛋白5(AQP5)ELISA KitDog aquaporin-5,AQP5 ELISA kit
犬双氢睾酮(DHT)ELISA KitCanine Dihydrotestosterone,DHT ELISA Kit
犬视黄醇结合蛋白4(RBP-4)ELISA KitCanine Retinol binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit
犬生长激素(GH)ELISA KitDog growth hormone,GH ELISA Kit
犬肾损伤分子1(Kim-1)ELISA KitCanine kidney injury molecule 1,Kim-1 ELISA Kit
犬肾素(Renin)ELISA KitCanine Renin ELISA Kit
犬肾上腺髓质素(ADM)ELISA KitDog adrenomedullin,ADM ELISA Kit
犬肾上腺素(EPI)ELISA KitCanine Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit
犬神经型一氧化氮合成酶(nNOS)ELISA KitCanine Neuronal Nitric Oxide Synthase,nNOS ELISA Kit
犬三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA KitCanine Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit
犬软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA KitDog cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA kit
犬热休克蛋白70kDa蛋白1A(HSPA1A)ELISA KitDog heat shock 70 kDa protein 1A,HSPA1A ELISA kit
犬热休克蛋白70(HSP⁻⁷0)ELISA KitCanine Heat Shock Protein 70,HSP⁻⁷0 ELISA Kit
犬醛固酮(ALD)ELISA KitCanine aldosterone,ALD ELISA Kit
犬前列腺特异性抗原(PSA)ELISA KitCanine prostate specific antigen,PSA ELISA Kit
犬前列腺素F2α(PGF2α)ELISA KitCanine Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit
犬前列腺素E2(PGE2)ELISA KitCanine Prostaglandin E2,PG-E2 ELISA Kit
犬前白蛋白(PA)ELISA KitCanine prealbumin,PA ELISA Kit
犬葡萄糖-6-磷酸酶(G6PC)ELISA KitDog Glucose-6-phosphatase,G6PC ELISA kit
犬皮质酮/肾上腺酮(CORT)ELISA KitCanine Corticosterone,CORT ELISA Kit
犬皮质醇(Cortisol)ELISA KitCanine Cortisol ELISA Kit
犬凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA KitCanine thrombin-antithrombin complex,TAT ELISA Kit
犬凝聚素(CLU)ELISA KitDog clusterin,CLU ELISA Kit
犬脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA KitCanine brain natriuretic peptide,BNP ELISA Kit
犬内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA KitDog Endothelial nitric oxide synthase,eNOS ELISA Kit
犬内皮素1(ET-1)ELISA KitDog Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit
犬内皮生长因子受体(EGFR)ELISA KitCanine Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR ELISA Kit
犬内毒素(ET)ELISA KitCanine endotoxin,ET ELISA Kit
犬缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(MIS/AMH)ELISA KitCanine Mullerian Inhibiting Substance/Anti-Mullerian Hormone,MIS/AMH ELISA Kit
裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次犬免疫球蛋白M(IgM)ELISA KitCanine Immunoglobulin M,IgM ELISA Kit
犬免疫球蛋白G(IgG)ELISA KitDog Immunoglobulin G,IgG ELISA Kit
犬免疫球蛋白E(IgE)ELISA KitCanine Immunoglobulin E,IgE ELISA Kit
犬免疫球蛋白A(IgA)ELISA KitCanine Immunoglobulin A,IgA ELISA Kit
犬硫酸雌酮(E1S)ELISA KitCanine Estrone Sulphate,E1S ELISA Kit
犬粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA KitDog Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor,GM-CSF ELISA Kit
犬类胰蛋白酶ELISA KitCanine tryptase ELISA Kit
犬类风湿因子(RF)ELISA KitCanine rheumatoid factor(RF)ELISA Kit
犬抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(AVP)ELISA KitDog arginine vasopressin,AVP ELISA kit
犬抗狂犬病毒(RV)抗体ELISA KitDog rabies virus(RV)antibody ELISA Kit
犬巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA KitCanine Macrophage-Derived Chemokine,MDC/CCL22 ELISA Kit
犬结缔组织生长因子(CTGF)ELISA KitCanine connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit
犬结蛋白(Des)ELISA KitDog desmin,Des ELISA Kit
犬窖蛋白Caveolin-1(CAV1)ELISA KitDog Caveolin-1,CAV1 ELISA kit
犬降钙素原(PCT)ELISA KitCanine Procalcitonin,PCT ELISA Kit
犬降钙素(CALCA)ELISA KitDog calcitonin,CALCA ELISA kit
克隆及表达
