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PCR 专用 LIC 克隆套装1μg
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
商家名片
吴*
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相关标签：克隆及表达
详细内容
PCR 专用 LIC 克隆套装1μg产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
PCR 专用 LIC 克隆套装1μg运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需PCR 专用 LIC 克隆套装1μg根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。
牛低密度脂蛋白(LDL)ELISA KitBovine Low Density Lipoprotein,LDL ELISA Kit
牛蛋白聚糖4(PRG4)ELISA KitBovine proteoglycan 4,PRG4 ELISA Kit
牛弹性蛋白酶2,中性粒细胞(ELA2)ELISA KitBovine elastase 2,neutrophil(ELA2)ELISA kit
牛弹性蛋白酶1,胰腺(ELA1)ELISA KitBovine elastase 1,pancreatic(ELA1)ELISA kit
牛单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA KitBovine MCP-1 ELISA Kit
牛催乳素(PRL/LTH)ELISA KitBovine Prolactin/Luteotropic Hormone,PRL/LTH ELISA Kit
牛催产素(OT)ELISA KitBovine oxytocin,OT ELISA Kit
牛促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA KitBovine gonadotropin-releasing hormone,GnRH ELISA Kit
牛促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA KitBovine adrenocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit
牛促卵泡素(FSH)ELISA KitBovine follicle-stimulating hormone,FSH ELISA Kit
牛促甲状腺素(TSH)ELISA KitBovine Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit
牛雌酮(E1)ELISA KitBovine estrone,E1 ELISA kit
牛雌三醇(E3)ELISA KitBovine Estriol,E3 ELISA Kit
牛雌激素(E)ELISA KitBovine Estrogen,E ELISA Kit
牛成纤维细胞生长因子23(FGF23)ELISA KitBovine Fibroblast Growth Factor 23,FGF23 ELISA Kit
牛成纤维细胞生长因子21(FGF21)ELISA KitBovine fibroblast growth factor 21,FGF21 ELISA kit
牛长链脂酰CoA脱氢酶(ACADL)ELISA KitBovine acyl-Coenzyme Adehydrogenase,long chain(ACADL)ELISA kit
牛草酰乙酸ELISA KitBovine oxaloacetic acid ELISA kit
牛杆菌抗体(IgM)ELISA KitBovine brucella antibody(IgM)ELISA kit
牛杆菌抗体(IgG)ELISA KitBovine Brucella antibody IgG ELISA kit
牛补体片断5a(C5a)ELISA KitBovine complement fragment 5a,C5a ELISA kit
牛丙二酸单酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA KitBovine malonyl coenzyme A ELISA kit
牛丙二醛(MDA)ELISA KitBovine Malondialdehyde,MDA ELISA Kit
牛表皮生长因子(EGF)ELISA KitBovine Epithelial growth factor,EGF ELISA Kit
牛白三烯B4(LT-B4)ELISA KitBovine leukotriene B4,LT-B4 ELISA kit
牛白介素8(IL-8)ELISA KitBovine Interleukin 8,IL-8 ELISA Kit
牛白介素6(IL-6)ELISA KitBovine Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit
牛白介素5(IL-5)ELISA KitBovine Interleukin 5,IL-5 ELISA Kit
牛白介素4(IL-4)ELISA KitBovine interleukin 4,IL-4 ELISA Kit
牛白介素2受体(IL-2R)ELISA KitBovine Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA kit
牛白介素22(IL22)ELISA KitBovine interleukin 22,IL22 ELISA kit
牛白介素2(IL-2)ELISA KitBovine Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit
牛白介素1β(IL-1β)ELISA KitBovine Interleukin 1β,IL- 1β ELISA kit
牛白介素17(IL-17)ELISA KitBovine Interleukin 17,IL-17 ELISA Kit
牛白介素12(IL-12)ELISA KitBovine Interleukin 12,IL-12 ELISA Kit
PCR 专用 LIC 克隆套装1μg牛白介素10(IL-10)ELISA KitBovine Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit
牛白介素1(IL-1)ELISA KitBovine Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit
牛γ干扰素(IFN-γ)ELISA KitBovine Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit
牛γ氨基丁酸(GABA)ELISA KitBovine Gamma-aminobutyric acid,GABA ELISA Kit
牛β-乳球蛋白(β-LG)(过敏原Bosd5)(LGB)ELISA KitBovine beta-lactoglobulin(Beta-LG)(allergen Bosd5)(LGB)ELISA kit
牛β羟基丁酸脱氢酶(β-HBDH)ELISA KitBovine β-Hydroxybutyrate Dehydrogenase,β-HBDH ELISA Kit
牛β羟丁酸(βOHB)ELISA KitBovine Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA Kit
牛β内啡肽(β-EP)ELISA KitBovine Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit
牛β干扰素(IFN-β/IFNB)ELISA KitBovine Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA Kit
牛β-防御素(β-Defensins)ELISA KitBovine β-Defensins ELISA Kit
牛α乳清蛋白(α-La)ELISA KitBovine α Lactalbumin,α-La ELISA Kit
牛α晶体B链(CRYAB)ELISA KitBovine Alpha-crystallin B chain,CRYAB ELISA kit
牛α干扰素(IFN-α)ELISA KitBovine Interferon α,IFN-α ELISA Kit
牛α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA KitBovine α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit
牛P物质(SP)ELISA KitBovine substance P,SP ELISA kit
牛N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA KitBovine N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG ELISA Kit
牛N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA KitBovine N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP ELISA kit
克隆及表达
