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克必隆 B 载体2μg
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
商家名片
吴*
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相关标签：克隆及表达
详细内容
克必隆 B 载体2μg运输及保存:
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
常温运输和保存，但介质需 4℃保存，PMSF 需要-20℃保存，有效期一年。自备试剂 去离子水、20%乙醇、0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜
使用方法
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
1. 将直链淀粉-琼脂糖介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 MBP 蛋白产量决定，其最大载量为 10 mg MBP蛋白/mL 介质，请根据实验需要取适量的介质加入层析柱中）。
2. 用 5 倍柱体积（柱体积指的是填料介质的体积，下同）自备去离子水洗柱，共 3 次。
3) 用传统的层析方法或 SDS-PAGE 电泳分离靶蛋白和蛋白酶。3. 用 5 倍柱体积的新配的结合缓冲液洗柱，进行平衡，使填料介质处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
4. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清，将细胞沉淀（约100 mg）悬于 2 mL 冰冷的现配的细胞洗涤液中，4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞沉淀后，再次悬于 2 mL 冰冷的细胞洗涤液中。
克必隆 B 载体2μg5. 制备细胞裂解物：
1) 如果所用载体不带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-c2）a) 超声破碎细胞，功率 30 W，保持细胞低温（0℃），直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。（超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。）b) 为使溶液澄清，向上述细胞洗涤液中加入 35 uL PMSF（10mg/mL）。c) 4℃下 13000-15000 g 离心 30 分钟，以去除残留细胞和细胞碎片
以防堵柱，收集上清样品，留样做 SDS-PAGE 电泳对照，其余样品用于纯化 MBP 融合蛋白，直接进入第 6 步。
2) 如果所用载体带 MBP 信号肽序列（如 pMAL-p2）a) 4℃ 5000 g 离心 15 分钟收集细胞，沉淀悬于 1 mL 冰冷的现配的细胞裂解液中。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
6. 将样品加到平衡好的直链淀粉-琼脂糖介质中（保证目的蛋白与介质充分接触，以提高目的蛋白的回收率），收集流出液。
7. 用 10-15 倍柱体积的结合缓冲液（配方见上表）进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
8. 使用 5-10 倍柱体积的现配的麦芽糖洗脱液洗脱结合的融合蛋白，收集洗脱液（即目的蛋白组分）。
11. 用适当的蛋白酶切割融合蛋白释放靶蛋白。
1) 加入自备的凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选择）。每毫升介质中加入 50 单位的溶于 1 mL PBS 溶液的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。
2) 4℃以 500 g 离心 5 分钟，上清小心转移到新离心管中。
克必隆 B 载体2μg产品及特点:
MBP（麦芽糖结合蛋白，Maltose Binding Protein）标签蛋白大小为 40kDa，由 的 malE 基因编码。MBP 可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达，MBP 可以融合在蛋白的 N 端或 C 端。MBP 融合蛋白可通过交联淀粉亲和层析一步纯化，结合的融合蛋白可用 10 mM 麦芽糖在生理缓冲液中进行洗脱。如果要去除 MBP 融合部分，可用位点特异性蛋白酶切除。可用 MBP 抗体或表达的目的蛋白特异性抗
体检测 MBP 标签标记的重组蛋白。由于 MBP 融合蛋白原核表达载体具有表达效率高，易于纯化等优点。在现代分子克隆中 MBP 常作为融合蛋白被广泛应用。
本产品就是专门用于分离纯化 MBP 融合蛋白的试剂盒，它具有下列特点：
1. 一站式套装，含所需的直链淀粉和琼脂糖介质、溶液和层析柱，操作非常方便。
2. 提供 2 mL 直链淀粉-琼脂糖介质，其最大载量为 10 mg MBP 蛋白/mL介质。
3. 采用麦芽糖温和洗脱，无去污剂和变性剂对蛋白活性的影响。
4. 本介质可以反复使用多次。
猴钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)IgM抗体ELISA KitMonkey keyhole limpet hemocyanin(KLH) IgM antibody ELISA Kit
猴钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)IgG抗体ELISA KitMonkey keyhole limpet hemocyanin(KLH)IgG antibody ELISA Kit
猴胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA KitMonkey Insulin-like Growth Factor 1,IGF-1 ELISA KIT
猴胰岛素(INS)ELISA KitMonkey Insulin,INS ELISA Kit
猴血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA KitMonkey fibrinogen degradation product,FDP ELISA kit
猴三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA KitMonkey tri-iodothyronine,T3 ELISA kit
猴绒毛膜促性腺激素(CG)ELISA KitMonkey chorionic gonadotrophin,CG ELISA kit
猴前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)ELISA KitMonkey Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9 ELISA kit
猴皮质醇(COR)ELISA KitMonkey cortisol,COR ELISA kit
猴尿微量白蛋白(ALB)ELISA KitMonkey microalbunminuria,MAU/ALB ELISA Kit
猴可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA KitMonkey soluble Vascular cell adhesion molecule 1,sVCAM-1 ELISA Kit
猴可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA KitMonkey Soluble Intercellular Adhesion Molecule-1,sICAM-1 ELISA Kit
猴抗肝细胞膜抗体(LMA)ELISA KitMonkey anti-liver cell membrane antibody,LMA ELISA Kit
猴精氨酸酶1(ARG1)ELISA KitMonkey Arginase 1,ARG1 ELISA Kit
猴甲状腺素(T4)ELISA KitMonkey thyroxine,T4 ELISA kit
猴环磷酸腺苷(cAMP)ELISA KitMonkey cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
猴环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA KitMonkey cyclic Guanosine monophosphate,cGMP ELISA Kit
猴骨形态发生蛋白受体2型(BMPR2)ELISA KitMonkey bone morphogenetic protein receptor type-2,BMPR2 ELISA kit
猴谷胱甘肽S转移酶A1(GSTA1)ELISA KitMonkey Glutathione S-transferase A1,GSTA1 ELISA kit
猴肝炎病毒细胞的受体1/肾损伤分子1/KIM1(HAVCR1)ELISA KitMonkey hepatitis A virus cellular receptor 1/KIM1,HAVCR1 ELISA kit
猴分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA KitMonkey secreted frizzled-related protein 1,SFRP1 ELISA kit
猴催乳素(PRL/LTH)ELISA KitMonkey Prolactin/Luteotropic Hormone,PRL/LTH ELISA Kit
猴促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA KitMonkey adrenocorticotropic hormone,ACTH ELISA kit
猴促肾上皮质激素释放激素(CRH)ELISA KitMonkey corticoliberin,CRH ELISA kit
猴超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA KitMonkey high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit
猴补体片断3b(C3b)ELISA KitMonkey complement fragment 3b,C3b ELISA kit
猴补体蛋白5(C5)ELISA KitMonkey complement C5a anaphylatoxin,C5 ELISA kit
猴白介素1a(IL1A)ELISA KitMonkey Interleukin-1 alpha,IL1A ELISA kit
猴β干扰素(IFN-β)ELISA KitMonkey Interferon β,IFN-β ELISA Kit
猴β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA KitMonkey amyloid beta peptide 1-42,Aβ1-42 ELISA Kit
猴α干扰素(IFN-α)ELISA KitMonkey Interferon α,IFN-α ELISA Kit
猴slit同源物2(果蝇)(SLIT2)ELISA KitMonkey slit homolog 2(Drosophila)(SLIT2)ELISA kit
猴E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA KitMonkey E-Selectin ELISA kit
克必隆 B 载体2μg猴CD34分子(CD34)ELISA KitMonkey cluster of differentiation 34,CD34 ELISA Kit
猴25羟基维生素D3(25 HVD3)ELISA KitMonkey 25-hydroxy vitamin D3,25 HVD3 ELISA kit
大鼠ELISA Kit
大鼠组织因子与活化凝血因子7复合物ELISA KitRat tissue factor(TF)/coagulation factor VII(F7) complex ELISA kit
大鼠组织因子(TF)前体 ELISA KitRat Tissue Factor(TF)Precursor ELISA Kit
大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA) ELISA KitRat Tissue-type Plasiminogen Actilyse,t-PA ELISA Kit
大鼠组织蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA KitRat Histone Deacetylase,HD ELISA Kit
大鼠组铵N-甲基转移酶(HNMT)ELISA KitRat Histamine N-methyltransferase,HNMT ELISA kit
大鼠足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA KitRat Podocalyxin,PCX ELISA Kit
大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA KitRat Total bile acide,TBA ELISA Kit
大鼠总胆红素(TB)ELISA KitRat total bilirubin,TB ELISA kit
大鼠自然抗性相关巨噬细胞蛋白1(NRAMP-1)ELISA KitRat natural resistance-associated macrophage protein 1,NRAMP1 ELISA kit
大鼠转铁蛋白(TF)ELISA KitRat Transferrin,TF ELISA Kit
克隆及表达
