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赫澎(上海)生物科技有限公司 主营产品:生物试剂,标准品,培养基,elisa试剂盒,多肽合成,实验室仪器耗材

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公司新闻

HEPENGBIO细菌草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase;PAT)活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

点击次数:166发布时间:2025/2/8 14:46:15

主要用途

 

HEPENGBIO细菌草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase;PAT)活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过通用底物草铵膦,通过草铵膦乙酰转移酶的作用,将乙酰辅酶A上的乙酰基团,转移到草铵膦分子上的过程中,释放出巯基辅酶A,进而使用巯基荧光探针,产生高度荧光产物,即采用荧光法来测定细菌裂解萃取样品中酶活性的技术方法。其适用于各种野生型、培养或工程细菌等裂解萃取液样品、部分或完全纯化酶样品中草铵膦乙酰转移酶的特异活性检测,以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。

 

技术背景

 

草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricinN-acetyltransferase;PAT;EC2.3.1.183)的系统学名为乙酰辅酶A:草铵膦-N-乙酰转移酶(acetyl-CoA:phosphinothricin N-acetyltransferase),属于乙酰转移酶家族中一员。其功能在于乙酰化作用,实现共价分子修饰,将乙酰辅酶A上的乙酰基团共价性转移到受体分子草铵膦(phosphinothricin)的游离氨基团上,使之乙酰化,代谢形成乙酰草铵膦(L-N-acetyl-phosphinothricin),从而使非选择性接触性除草剂(herbicide)失活,例如草铵膦(L-phosphinothricin或glufosinate)。为了使植物,尤其是食物性植物,既能防止除草剂的毒性,又能防止生物体内的自动毒性(autotoxicity),在基因工程中,转入草铵膦乙酰转移酶,产生除草剂耐受型遗传工程作物,包括水稻、玉米、大麦等。土壤细菌、海洋细菌等菌种的草胺膦乙酰转移酶具有对于除草剂的解毒作用,可以运用于植物转基因。基于底物草铵膦,在草铵膦乙酰转移酶的作用下,将乙酰辅酶A上的乙酰基团,转移到草铵膦分子上,由此产生乙酰草铵膦和巯基辅酶A(CoA-SH),终止反应后,与巯基荧光探针7-二乙基胺基马来酰亚胺苯基甲基香豆素(7-diethylamino-3-(4-maleimidylphenyl)-methylcoumarin;CPM)反应,产生高度荧光产物,在荧光分光光度仪下检测(激发波长360-390nm,散发波长450-470nm),来定量测定草铵膦乙酰转移酶的特异活性。其反应系统为:


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