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公司新闻
总果胶含量检测试剂盒说明书-赫澎生物研选
点击次数：221发布时间：2021/4/22 10:09:46
总果胶含量检测试剂盒说明书
注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：YX-W-A517
规格：100T/48S
产品内容：
提取液：液体 110mL×2 瓶，4℃保存。提取液二：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。试剂：浓硫酸 25mL，自备。
试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
微量法
标准品：粉剂×1 支，10mg 半乳糖醛酸，4℃保存。临用加入0.943mL 提取液二，配成50μmol/mL 的标准液
产品说明：
果胶是植物细胞壁主要组成成分之，分为水溶性果胶和不溶性果胶，不溶性果胶为原果胶（碱溶性果胶）。果胶是种天然高分子化合物，具有良好的胶凝化和乳化稳定作用，已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，与原有的可溶性果胶进步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物，在 530 nm 处有特征吸收峰。
仪器和试剂：">试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
、总果胶的提取：
将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液体积(mL)为1: 20 的比列（建议取约 0.05g 样品， 加入1mL 提取液），置于90℃恒温水浴锅中浸提 30min，取出冷却后于 5000g、25℃离心10min，去掉上清，沉淀中再加入1mL 提取液重复操作次，离心后去上清，沉淀中加入 1mL 提取液二， 置于90℃恒温水浴锅中水解 1h，取出冷却后于 8000g、25℃离心15min，取上清液待测。
二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 530nm，蒸馏水调零。
2、将50μmol/mL 标准液用提取液二稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 的标准溶液备用。
3、操作表：
第 1 页 共 2 页
| 试剂名称 | 空白管 | 标准管 | 对照管 | 测定管 |
| 样本（μL） | - | - | 25 | 25 |
| 标准品（μL） | - | 25 | - | - |
| 蒸馏水（μL） | 25 | - | - | - |
| 试剂（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 混匀、90℃放置 10min，取出后冷却 | ||||
| 试剂二（μL） | - | - | 25 | - |
| 试剂三（μL） | 25 | 25 | - | 25 |
| 混匀，25℃静置30min 后吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，测定530nm 处吸光值，分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和A 测定管。△A 标准=A 标准管-A 空白管，△A 测定=A 测定管-A 对照管。 | ||||
三、总果胶含量的计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b， 将△A 测定带入方程得到x（μmol/mL）
2、 总果胶含量的计算：
总果胶含量(μmol /g 鲜重)= x×V 提取液二÷W =x÷W
V 提取液二：加入提取液二的体积，1mL；W：样本鲜重，g。
注意事项：
1、浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热、冷却后再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
2、若吸光值超过1，可将样本提取液二进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
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