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公司新闻
土壤 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性检测试剂盒-说明书-可见分光光度法
点击次数：309发布时间：2021/3/9 16:44:40
土壤 N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号：YX-C-SNAG
规格：50T/24S
产品内容：
试剂：液体40mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用加入3mL 丙酮溶解，用不完的试剂仍-20℃保存； 试剂三：液体60mL×1瓶，4℃保存；
标准品：液体1mL×1支，5 mmol/L的对硝基苯酚溶液，4℃保存。临用用试剂将标准品稀释50倍得100µmol/L 的标准溶液。
产品说明：
土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（S-NAG）是土壤微生物分泌的溶酶体中的种酸性水解酶。其活性变化与机体某些病理状态密切相关。
S-NAG分解对硝基苯β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、30-50目筛（或更小）和蒸馏水。
操作步骤：
、样本处理：
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。二、测定步骤：
1. 分光光度计预热30min，波长调至400nm，蒸馏水调零。
2. 加样表：
| 试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
| 风干土样（g） | 0.1 | 0.1 | - | - |
| 试剂（µL） | 550 | 550 | - | - |
| 试剂二（µL） | 50 | - | - | - |
| 混匀， 37℃水浴1h 后，立即沸水浴5min（盖紧， 防止水分散失），流水/冰浴冷却。 | - | - | ||
| 试剂二（µL） | - | 50 | - | - |
| 12000g 25℃离心10min，取上清液 | - | - | ||
| 上清液（µL） | 500 | 500 | - | - |
| 标准品（µL） | - | - | 500 | - |
| 蒸馏水（µL） | - | - |
| 500 |
| 试剂三（µL） | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
| 室温静置2min 后，10000g 常温离心5min，取上清测定400nm处的吸光值A。分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算∆A=A 测定管-A 对照管，∆A标准=A标准管-A空白管。每个测定管设个对照管。 | ||||
三、S-NAG 活力计算：
单位的定义：每天每g土样中产生1 µmol 对硝基苯酚定义为个酶活力单位。
S-NAG活力（U/g 土样）＝∆A÷ (∆A标准÷C标准)×V 反总÷W÷T =1.44× ∆A÷ ∆A标准÷W。
T：反应时间，1h=1/24d；V 反总：反应体系总体积：6×10-4 L；C标准：标准溶液浓度，100µmol/L； W：样本质量，g。
注意事项：
当∆A 大于 1 时，建议将上清液稀释后进行测定；当∆A 小于 0.02 时，建议延长反应时间。计算公式中注意乘以稀释倍数或注意反应时间变化。
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
