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公司新闻
乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒-微量法-赫澎研选
点击次数：182发布时间：2020/12/15 10:10:21
乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：YX-W-A001
规格：100T/48S
产内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂：液体 7 mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存，用时加入 1.3 mL 双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20 ℃保存，可保存两，禁止反复冻融；
试剂三：液体 7 mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 25 mL×1 瓶，4℃保存；
丙酮酸钠标准液：液体 1 mL×1 支，4℃保存，2µmol/ml。
产简介：
LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着 NAD+/NADH 之间互变。
LDH 催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进步与 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
、粗酶液提取：
1. 细菌、细胞或组织样的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃ 离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 血清（浆）样：直接检测。
3. 丙酮酸钠标准液：取 100µL 标准液，倍比稀释至 1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL，用2、1、0.5、0.25、0.125、0µmol/mL 做标准曲线。
二、测定操作表：
1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。
2. 样本测定
第 1页，共 2 页
| 试剂名称(µL) | 测定管 | 对照管 | 标准管 |
| 待测样本 | 10 | 10 | - |
| 标准液 | - | - | 10 |
| 试剂 | 50 | 50 | 50 |
| 试剂二 | 10 | - | - |
| 蒸馏水 | - | 10 | 10 |
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确水浴 15min
| 试剂三 | 50 | 50 | 50 |
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min
| 试剂四 | 150 | 150 | 150 |
充分混匀，室温静置 3min，取200µL 转移至微量玻璃比色皿或在 96 孔板中，450 nm 下测定吸光度，计算∆A=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设个对照。
根据标准管测定值和浓度做标准曲线，y 为标准浓度，µmol/mL；x 为对吸光度（减去浓度为0 的标准管的OD 值）。
LDH 活力单位计算：
1. 计算样丙酮酸的含量，即将∆A 带入回归方程中（x），计算y 值
2. 血清（浆）LDH 活力的计算
单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为个酶活力单位。
LDH（U/mL）=y×V 样÷V 样÷T×103=66.7×y
3. 细胞、细菌和组织中LDH 活力的计算
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 丙酮酸定义为个酶活力单位。
LDH（U/mg prot）= y×V 样÷（Cpr×V 样）÷T×103=66.7×y÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为个酶活力单位。
LDH（U/g 鲜重）= y×V 样÷（W÷V 样总×V 样）÷T×103=66.67×y÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为个酶活力单位。
LDH（U/104 cell）= y×V 样÷（500÷V 样总×V 样）÷T×103=0.133×y
V 样：反应体系中加入的样本体积，10µL=0.01mL；V 样总：加入的提取液体积，1mL；T： 反应时间，15 min；Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；W：样质量，g；500：细胞或细菌总数， 500 万；103：1µmol/mL=103nmol/mL。
