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公司新闻
脂肪酶（LPS）活性试剂盒说明书 微量法 100/96S
点击次数：201发布时间：2020/9/17 16:17:03
脂肪酶（LPS）活性试剂盒说明书
微量法 100/96S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS
广泛的存在于各种生物中。血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。
测定原理：
LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性。
自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调
式移液枪、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。每次使用前用震荡混匀器剧烈震荡 20min。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 瓶，10 µmol/mL 的标准溶液，4℃保存。临用前加入 3.168 mL 试剂三，充
分溶解。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7
秒，总时间 3min）；然后 12000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体: 直接检测。
LPS 测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 710 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min。
3. 空白管：取 1.5mL 离心管，依次加入 130 μL 试剂一 50 μL 试剂二和 20 μL 蒸馏水，置
于 37℃震荡反应 10 min；加入 400μL 试剂三，反复震荡混匀 10min，25℃，2000g 离心
10 min；小心吸取上层溶液 300 μL，加入 1.5mL 离心管中，再加 150 μL 试剂四，反复
震荡 5min；25℃，2000g 离心 10 min，小心吸取上层溶液 200μL，加入微量石英比色皿
/96 孔板，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 空白管。
4. 测定管：取 1.5mL 离心管，依次加入 130 μL 试剂一 50 μL 试剂二和 20 μL 上清液，置
于 37℃震荡反应 10 min；加入 400μL 试剂三，反复震荡混匀 10min，25℃，2000g 离心
10 min；小心吸取上层溶液 300 μL，加入 1.5mL 离心管中，再加 150 μL 试剂四，反复
震荡 5min；25℃，2000g 离心 10 min，小心吸取上层溶液 200μL，加入微量石英比色皿
/96 孔板，于 710nm 处测定吸光值。记为 A 测定管。
5. 标准管：取标准品 300 μL，加入 1.5mL 离心管中，再加 150 μL 试剂四，反复震荡 5min；
25℃，2000g 离心 10 min，小心吸取上层溶液 200μL，加入微量石英比色皿/96 孔板，于
710nm 处测定吸光值。记为 A 标准管。
注意：空白管和标准管只需测定一次。
LPS 活性计算公式：
1. 组织 LPS 活性
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（Cpr×V 样）
÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/g) =[C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷W
2. 细胞 LPS 活性
活性单位定义：37℃中每 104 个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/104
cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（细胞数量×V
样÷V 样总）÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷细胞数量
3. 血清等液体 LPS 活性
活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/mL) = [C 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷V 样÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]
C 标准品：10 µmol/mL；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中加入样本体积，0.02mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议
使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
1. 组织 LPS 活性
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（Cpr×V 样）
÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol/min/g) =[C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷W
2. 细胞 LPS 活性
活性单位定义：37℃中每 104 个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/104
cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（细胞数量×V
样÷V 样总）÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷细胞数量
3. 血清等液体 LPS 活性
活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (μmol /min/mL) = [C 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷V 样÷T
=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]
C 标准品：10 µmol/mL；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中加入样本体积，0.02mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议
使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。
注意事项：
1、试剂三有一定毒性，实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、实验过程中须远离火源。
