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公司新闻
游离脂肪酸含量测试盒说明书-赫澎生物
点击次数：138发布时间：2020/9/17 16:15:51
游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌
功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。
测定原理：
在弱酸性条件下，FFA 与铜盐反应生成铜皂，在 715nm 处有特征吸收峰，在一定范围内游
离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。
自备仪器和用品：
研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
样品中 FFA 提取：
1、 血液：将所取血液，室温静置 1 h 后，于 4 ℃ 离心机 3500 rpm 离心 15min，取上清 0.1mL，
加 1mL 试剂一，震荡提取 3h，8000g，4℃离心 10min，取上清液待测。
2、 组织：组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后称取约 0.1g 转移至离
心管，按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例加入试剂一，震荡提取 3h，
8000g，4℃离心 10min，取上清液待测。
3、 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声
2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；震荡提取 3h，然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清
待测。
测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 715 nm。
2. 空白管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 试剂二，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层
200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板，调零。
3. 测定管：取上清液 0.4mL，加 0.2mL 试剂三，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层
200μ L 于微量石英比色皿/96 孔板，测定吸光值，记为 A。
FFA 含量计算：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R
2
=0.994
1. 血液中 FFA 含量计算
FFA（nmol/mL）=(A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷V 样=1333×(A-0.0055)
2. 组织中 FFA 含量计算
（1）按样本蛋白浓度计算
FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按样本质量计算
FFA（nmol/g）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)=133×(A-0.0055)÷W
3. 按细胞数量计算
FFA（nmol/104
cell）= (A-0.0055)÷0.0075×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)
=133×(A-0.0055)÷细胞数量
V 样总：上清液总体积，1 mL；V 反总：反应总体积，0.4mL；V 样：加入样本体积，0.4mL；
W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0038 x+ 0.0055，R
2
=0.994
1. 血液中 FFA 含量计算
FFA（nmol/mL）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反总÷V 样= 2666×(A-0.0055)
2. 组织中 FFA 含量计算
（1）按样本蛋白浓度计算
FFA（nmol /mg prot）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反总÷(V 样×Cpr)
= 266×(A-0.0055)÷Cpr
（2）按样本质量计算
FFA（nmol /g）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)
= 266×(A-0.0055)÷W
3. 按细胞数量计算
FFA（nmol /104
cell）= (A-0.0055)÷0.0038×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)
=266×(A-0.0055)÷细胞数量
V 样总：上清液总体积，1 mL；V 反总：反应总体积，0.4mL；V 样：加入样本体积，0.4mL；
W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL
注意事项：
1. 蛋白含量不可直接用提取的上清液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公
司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。
2. 最低检出限为 0.8 mmol/L
