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技术文章
组织活性氧（ROS）荧光法测试盒（绿色）说明书
点击次数：2715 发布时间：2025/2/8 14:50:58
组织活性氧（ROS）荧光法测试盒（绿色）说明书
（ 荧光法48样）
一、产品简介：
在正常的生命过程中，活性氧是维护生命所必需，在体内处于一种不断产生、不断清除的 动态平衡中，始终维持在一个正常的水平，可以说是机体的一种有效的防御系统。活性氧的 生理功能为参与体内的电子转移、杀菌和物质代谢。
利用化学荧光指示剂即荧光探针：2’,7’-Dichlorofluorescin Diacetate，（DCFH-DA）检测 组织内的活性氧。DCFH可以被各种活性氧所氧化，转变成一种可以产生荧光信号的物质即 二氯荧光素（2’,7’-Dichlorofluorescein ，DCF），所得到的DCF 荧光信号并不是被某种单 一的活性氧氧化所产生，所以用这种荧光指示剂测定的活性氧，反映的是所有活性氧的总的 氧化能力。这种荧光信号在激发波长 488nm和发射波长 525nm处有最大波峰，其荧光强度 和活性氧水平成正比。
二、试剂盒的组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体 60mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
试剂一 | 液体 μL×1 支 | -20℃保存 | 低温时易结晶，使用前可在25℃水浴至 全部融解后使用。 |
三、所需的仪器和用品：
荧光酶标仪、低温台式离心机、可调式移液器、黑色 96孔板、研钵和冰。
四、活性氧（ROS）测定：
建议正式实验前选取 2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：取约 0.1g组织，加入 1mL提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm ，4℃离心
10min，取上清置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例进行提取
2、上机检测：
① 酶标仪预热 30min，调节波长。
② 所有试剂解冻至室温（25℃)。
③ 在黑色 96孔板中依次加入：
试剂名称(μL） | 测定管 | 空白管 |
样本 | 200 |
|
提取液 |
| 200 |
试剂一 | 2 | 2 |
混匀，37℃避光孵育 30min后于激发波长 488nm，发射波 长 525nm处读取荧光值 F。荧光强度=F测定-F空白 | ||
【注】1.若荧光值较小，可以增加37℃孵育反应时间 T（如增至1 小时）,或增加试剂一 （由 2μL增至5μL）；改变后的 T需代入公式重新计算。
2.若荧光值较大，可以减少 37℃孵育反应时间 T（如减至 10min）,或稀释试剂一 （稀释 5~10倍）；改变后的T 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1 、按照样本质量计算：
活性氧强度定义：每克组织每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。 活性氧强度=荧光强度÷T÷W×V
2 、按照样本蛋白浓度计算：
活性氧强度定义：每毫克组织蛋白每分钟产生的荧光强度定义为活性氧强度。 活性氧强度=荧光强度÷T÷Cpr×V
【注】数据与质量和蛋白浓度的单位无关。
W---样品质量，g； T---反应时间，30 min； V---加入提取液体积，1 mL；
Cpr---上清液蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
