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技术文章
冰冻切片组织琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒产品说明书
点击次数：2774 发布时间：2024/7/30 11:26:47
HEPENGBIO冰冻切片组织琥珀酸脱氢酶活性染色试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO冰冻切片组织琥珀酸脱氢酶（SDH）活性染色试剂是一种旨在使用合成电子受体四氮唑兰染料，通过反应系统的作用，组织样本中酶活性部位呈现出蓝黑色沉淀现象的方法。其适合于各种动物组织冰冻切片样品琥珀酸脱氢酶的活性检测。用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，显色清晰。
技术背景
琥珀酸脱氢酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循环（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循环中与细胞线粒体膜相关的重要元素，位于线粒体内膜，参与细胞呼吸链。琥珀酸脱氢酶由27kd和70kd两个单体组成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反应，产生延胡索酸（furmarate），通过黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）传递电子。基于琥珀酸脱氢酶的反应原理，使用人工电子受体染料硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受来自还原型黄素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的电子，而被还原，产生不溶性蓝色或蓝黑色甲暨色素。据此证明组织细胞琥珀酸脱氢酶的活性。
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 100毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO反应液A（Reagent C1） 2毫升
HEPENGBIO反应液B（ReagentC2） 2管
HEPENGBIO固着液（Reagent D） 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent B）和HEPENGBIO反应液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器
培养箱：用于反应孵育
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
染色开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化；移取1毫升HEPENGBIO反应液A（ReagentC1）到1管HEPENGBIO反应液B（ReagentC2），混匀，标记为HEPENGBIO反应工作液，置于冰槽里，避免光照；然后移取900微升HEPENGBIO染色液（ReagentB）到新的1.5毫升离心管，加入100微升HEPENGBIO反应工作液，混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后进行下列操作。
1． 取出待测的10微米厚的冰冻组织切片
2． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
4． 小心加上200微升 HEPENGBIO染色工作液，铺满整个切片样品表面
5． 放进37℃培养箱里孵育10分钟，避免光照
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色工作液
7． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
9． 重复实验步骤7至8二次
10． 小心加上200微升HEPENGBIO固着液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面
11． 室温下孵育15分钟
12． 小心移去切片上的HEPENGBIO固着液（Reagent D）
13． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
14． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
15． 重复实验步骤13至14二次
16． 放上盖玻片或封片（中性树脂）
17． 即刻在光学显微镜下观察和计数：表达琥珀酸脱氢酶活性的组织细胞为阳性组织细胞，呈现蓝黑色。
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 操作时，须戴手套
3． HEPENGBIO染色液（Reagent B）和HEPENGBIO反应液（Reagent C）避免反复冻融
4． 阴性对照时，GENMEN染色工作液不含有HEPENGBIO反应工作液
5． 可以使用50毫摩尔丙二酸钠（Sodium malonate）作为抑制剂
6． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
7． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
8． 整个操作，在避光状态下进行
9． 染色孵育时间，根据样品和酶活性强弱调整，通常为5至30分钟
10． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
11． 样品染色后保存，避免光照
12． 本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
