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技术文章
细胞组蛋白脱乙酰化酶6（HDAC6）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途
点击次数：2746 发布时间：2024/7/30 11:04:35
主要用途
HEPENGBIO细胞组蛋白脱乙酰化酶6（HDAC6）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过比色探针对硝基苯胺标记乙酰化多肽底物，在特异性抑制剂的存在下，经过HDAC6脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用比色法来测定样品中酶活性的技术方法。其适用于各种细胞裂解萃取液样品（动物、人体）、部分或完全纯化酶样品中HDAC6的特异活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。种类III（class III）为NAD辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2同源，包括SIRT1至7等。其曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感。通过催化组蛋白上赖氨酸残基ε氨基酸的乙酰基团的水解脱离，改变核小体（nucleosome）结构达到调节基因表达，从而调节细胞周期和分化，一旦失控，则会导致肿瘤和衰老。HDAC6（EC3.5.1.98），属于种类IIb，含有2个重复相连的去乙酰化酶结构域（tandem deacetylase domain）和1个C末端锌指（zinc finder）区域。HDAC6主要分布在肾脏、肝脏、心脏和胰腺等组织细胞的胞浆中，其作用的底物包括α-微管蛋白（α-tubulin）、热休克蛋白70（HSP70）、SHP、Smad7、皮肌动蛋白（cortactin）、过氧化还原蛋白（peroxiredoxin）等，具有调节细胞运动、粘附、分子伴侣（chaperone）、聚集小体（aggresome）、自噬性（autophage）、热休克因子1（HSF-1）、PDGF的功能，以及细胞应激反应，参与蛋白折叠（folding）、泛素蛋白酶体通路（ubiquitin proteasome pathway）、 肿瘤生成等。其脱乙酰化目标序列为 XXXLys（Ac）X。基于乙酰化多肽具有抗氨基肽酶切离的功能，首先通过比色染料对硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）来标记乙酰化多肽底物，其次，在特异性抑制剂Tubacin的作用下，进行HDAC的脱乙酰化，底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈吸光值的黄色对硝基苯胺（波长405nm），由此来定量测定组蛋白脱乙酰基酶6的特异活性。其反应系统为：
HDAC6
Boc-Lys（Ac）-p-NA → Boc- Lys-p-NA
Tubacin
氨基肽酶
Boc- Lys-p-NA → Boc- Lys + p-NA
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
