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技术文章
亚铁含量 (亚铁嗪比色法) 检测试剂盒说明书 (货号：HP-A217W 微板法 96 样)
点击次数：2740 发布时间：2024/7/23 11:45:54
亚铁含量(亚铁嗪比色法) 检测试剂盒说明书
(货号：HP-A217W 微板法96样)
一、产品简介：
亚铁即二价铁可与亚铁嗪生成紫红色化合物，该有色物质在562nm 处有特征吸收峰， 进而计算得出亚铁含量。适用于检测组织、血清等样品中的亚铁含量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体 100mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
试剂一 | 液体26mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
试剂二 | 粉体×2支 | 4℃保存 | 用前甩几下或离心使粉体落入底部，每 支再加入1.2mL 的蒸馏水溶解备用。 |
试剂三 | 液体2mL×1支 | 4℃保存 |
|
标准品 |
液体1mL×1支 |
4℃保存 | 临用前用试剂三稀释50 倍(即取10μL的标准品至EP 管中，再加490μL 的试剂 三)，制备成2μg/mL 的亚铁标准品。 |
三、所需仪器和用品：
酶标仪、96孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。
四、亚铁含量检测：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实 验样本和试剂浪费！
1 、样本制备：
① 组织样本：
取约0. 1g 组织，加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃ ×12000rpm 离心5min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g) ：提取液体积(mL)为1：5~ 10的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)； 12000rpm 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量(104) ：提取液(mL)为500~ 1000：1的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。
2、上机检测：
①酶标仪预热30min ，设定波长到562nm。
② 所有试剂解冻至室温，在EP 管中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 标准管 (仅做一次) | 空白管 (仅做一次) |
样本 | 120 |
|
|
标准品 |
| 120 |
|
蒸馏水 |
|
| 120 |
试剂一 | 260 | 260 | 260 |
试剂二 | 20 | 20 | 20 |
充分混匀，置室温15min 后，若浑浊则需3000rpm 离心 5min后，取200μL上清液至96孔板中，于波长562nm处读取各管吸光度A。 | |||
【注】：1. 若A 测定管大于0.8，可用蒸馏水对样本上清液进行稀释，稀释倍数D 代入计算公式。
2. 若A 测定-A 空白的差值低于0.01，可增加样本上清液体积V2 (如由120μL 增至200μL 或更 多，则试剂一相应减少) ，标准管和空白管保持不变，则改变后的V2则带入公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照组织质量计算：
亚铁含量(μg/g)=(C 标准×V1) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V2÷V×W) ×D=2×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D
亚铁含量(nmol/g)=(C 标准×V1) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V2÷V×W) ×103÷Mr×D
=35.81×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷W×D
2、按细胞数量计算：
亚铁含量(μg/ 104cell)=(C 标准×V1) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷(V2÷V×细胞数量) ×D=2×(A 测定-A 空白)÷ (A 标准-A 空白) ÷细胞数量
亚铁含量(nmol/104cell)=(C 标准×V1) ×(A 测定-A 空白)÷ (A 标准-A 空白)÷(V2÷V×细胞数量)
×103÷Mr×D
=35.81×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白) ÷细胞数量×D
3、按照液体体积计算：
亚铁含量(μg/mL)=(C 标准×V1) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V2×D
=2×(A 测定-A 空白)÷ (A 标准-A 空白)×D
亚铁含量(μmol/L)=(C 标准×V1) ×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)÷V2×103÷Mr×D=35.81×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D
C 标准---亚铁标品浓度，2μg/mL； V2---加入样本体积，0. 12mL； W---样本取样质量，g；
Mr---亚铁分子量，55.847；
V1---加入标准品体积，0. 12mL；
V---提取液体积，1mL；
D---稀释倍数，未稀释即为1；
细胞数量---若取500万则把500代入公式计算。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
