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技术文章
甘油三酯（ TG） 含量检测试剂盒使用方法你知道吗？
点击次数：2673 发布时间：2024/7/22 11:57:14
甘油三酯（ TG） 含量检测试剂盒说明书
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：HP-W-B408
规格：100T/96S产品内容：
试剂一：自备，取玻璃空瓶，加入60mL正庚烷，60mL异丙醇，盖紧后混匀，4℃保存。
试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体3mL×1瓶，4℃避光保存。试剂五：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。试剂六：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1瓶，临用前加5mL试剂一，即1mg/mL甘油三酯标准溶液，4℃保存。
产品说明：
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。测定原理：用异丙醇抽提取TG，KOH 皂化TG 后水解生成甘油及脂肪酸，过碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与乙酰丙酮缩合生成黄色物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG 含量成正比。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量比色皿/96孔板、水浴锅、可调式移液枪、双蒸水、125mL玻璃空瓶。
操作步骤:
一、TG的提取：
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清待测。
2、细胞、细菌：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎
1min（强度20％，超声2s，停1s），8000g，4℃离心10min，取上清待测。
3、血清（浆）等液体样品：直接测定。二、测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到420 nm，蒸馏水调零。
2. 水浴锅预热到65℃。
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
双蒸水（µL） | 40 |
|
|
标准液（µL） |
| 40 |
|
TG待测液（µL） |
|
| 40 |
试剂一（µL） | 125 | 125 | 125 |
试剂二（µL） | 25 | 25 | 25 |
加试剂一后充分混匀，再加试剂二，剧烈振荡30s，静置，待分层后取上层溶液15µL，置于新的EP管中。
3. 甘油三酯含量测定：
| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
上层溶液（µL） | 15 | 15 | 15 |
试剂三（µL） | 50 | 50 | 50 |
试剂四（µL） | 15 | 15 | 15 |
充分混匀，65℃水浴3min | |||
试剂五（µL） | 50 | 50 | 50 |
试剂六（µL） | 50 | 50 | 50 |
充分混匀，65℃水浴15min | |||
转移至微量比色皿/96孔板测定420nm处吸光度，记为A空，A标和A测。注意：空白管和标准管只需测定一次。
三、计算公式：
1. 血清（浆）中甘油三酯含量：
TG 含量（mg/dL）=C 标准品×（A测－A空）÷（A标－A空）
=（A测－A空）÷（A标－A空）
C 标准品：1mg/mL；100：单位换算系数，1dL=100 mL。
2. 组织中甘油三酯含量：
(1) 按样本蛋白浓度计算
TG 含量（mg/ mg prot）=C 标准品×V×（A测－A空）÷（A标－A空）÷（Cpr×V）
=（A测－A空）÷（A标－A空）÷ Cpr
(2) 按样本鲜重计算
TG 含量（mg/ g鲜重）=C 标准品×V×（A测－A空）÷（A标－A空）÷W
=（A测－A空）÷（A标－A空）÷ W
C标准品：1mg/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；V：加入试剂一的体积，
1mL。
3. 细胞、细菌中甘油三酯含量：
TG 含量（mg/104cell）=C 标准品×（A测－A空）÷（A标－A空）÷细菌或细胞密度
=（A测－A空）÷（A标－A空）÷细菌或细胞密度
C 标准品：1mg/mL；细菌或细胞密度：104cell /mL。
注意事项：
1. 试剂盒中有易挥发性物质，实验过程中需佩戴手套和口罩，试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。
2. 加试剂二后需剧烈震荡，使待测液中甘油三酯得到充分提取。
3. 最低检出限为100µ mol/L。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
