企业档案
会员类型：标准版
已获得阿仪网信誉 等级评定
(0 -40)基础信誉积累，可浏览访问
(41-90)良好信誉积累，可接洽商谈
(91+ )优质信誉积累，可持续信赖
阿仪网标准版会员：11年
工商认证 【已认证】
最后认证时间：
注册号： 【已认证】
法人代表： 【已认证】
参观次数：4594575
技术文章
通用型（人体）线粒体DNA损伤（8-hydroxydeoxyguanosine）比色法定量检测试剂盒实验步骤参考说明书
点击次数：2695 发布时间：2024/7/22 11:53:25
HEPENGBIO通用型（人体）线粒体DNA损伤（8-hydroxydeoxyguanosine）比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO通用型（人体）线粒体DNA损伤（8-hydroxydeoxyguanosine）比色法定量检测试剂是一种旨在使用单克隆抗8-羟基脱氧鸟苷抗体竞争性结合样品中的8-羟基脱氧鸟苷和辣根过氧化酶缀合8-羟基脱氧鸟苷，由生色染料四甲基联苯胺参与反应，呈现黄色产物，即通过比色法定量评价（人体）线粒体样品DNA损伤水平的方法。主要适用于各种人体细胞或组织线粒体裂解样品8-羟基脱氧鸟苷的定量分析。广泛用于细胞衰老、细胞凋亡、肿瘤等的研究。产品即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
核酸氧化损伤（nucleotide oxidative damage），包括DNA和RNA损伤，是由于环境因子或细胞代谢影响，在逃避细胞防御机制的前提下，所产生的四种损伤之一：氧化、烷化（alkylation）、水解和碱基错配损伤等。而氧化损伤主要通过活性氧族（reactive oxygen species；ROS），包括超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hyｄroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）等的作用，使碱基羟基化和嘌呤环裂开，诱导鸟嘌呤（guanine；G）向胸腺嘧啶（thymine；T）的颠换（transversion），造成体细胞基因突变，影响细胞周期、基因转录、细胞凋亡等，最终导致各种疾病的发生，例如糖尿病、高血压、中风、癌症、衰老等。其中核酸损伤产物8-羟基脱氧鸟苷（8-hydroxy-2’-deoxyguanosine；8-OHdG）作为DNA损伤的分子标志；8-羟基鸟苷（8-hydroxyguanosine）作为RNA损伤的分子标志。8-羟基脱氧鸟苷是最常见的DNA损伤产物，也是氧化应急的生物标志。基于单克隆抗8-羟基脱氧鸟苷抗体竞争性结合样品中的8-羟基脱氧鸟苷和辣根过氧化酶缀合8-羟基脱氧鸟苷，由生色染料四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）参与反应，呈现黄色产物，在分光光度仪下（450nm波长），定量检测8-羟基脱氧鸟苷的含量。
产品内容
HEPENGBIO标准液（Reagent A） 6 X 300微升
HEPENGBIO酶促液（Reagent B） 2毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent C） 50毫升
HEPENGBIO底物液A（Reagent D） 2毫升
HEPENGBIO底物液B（Reagent E） 2毫升
HEPENGBIO终止液（Reagent F） 2毫升
HEPENGBIO抗体酶标板 4列
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；暂时不用，保存在－20℃冰箱里；HEPENGBIO底物液B（Reagent E）易挥发，密闭瓶盖，避免光照；HEPENGBIO抗体酶标板，密封干燥保存；3月
用户自备
1.5毫升离心管：用于工作液配制
培养箱：用于反应孵育
酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃或4℃冰箱里试剂盒中的试剂置于室温下30分钟均衡温度。然后进行下列操作：
一、 标准样品管浓度表：
HEPENGBIO标准液（ReagentA） | 标准8-羟基鸟苷浓度 |
A1 | 10纳克/毫升 |
A2 | 5纳克/毫升 |
A3 | 2.5纳克/毫升 |
A4 | 1纳克/毫升 |
A5 | 0.5纳克/毫升 |
A6 | 0 |
二、 标准样品和待测样品测定
1． 准备1列HEPENGBIO抗体酶标板：标记好标准样品、待测线粒体样品
2． 分别加入100微升HEPENGBIO标准液A1至A6到对应的标准样品孔里
3． 加入100微升待测样品到待测样品孔里
4． 分别加入50微升HEPENGBIO酶促液（Reagent B）到所有孔里
5． 摇动酶标板，充分混匀
6． 密封酶标板
7． 放进37℃培养箱里孵育60分钟（注意：培养箱保持湿润，避免干化）
8． 小心抽去上清液
9． 加入200微升HEPENGBIO清理液（Reagent C）
10． 室温下孵育10秒
11． 小心抽去清理液（注意：确保没有液体残留）
12． 重复实验步骤9至11四次
13． 准备1个1.5毫升离心管
14． 分别加入等量的HEPENGBIO底物液A（Reagent D）和HEPENGBIO底物液B（Reagent E），混匀
15． 加入100微升上述配制的HEPENGBIO底物工作液到标准样品和待测样品孔里
16． 室温下孵育15分钟，避免光照（注意：可见蓝色沉淀）
17． 加入50微升HEPENGBIO终止液（Reagent F），混匀（注意：可见蓝色变成黄色）
18． 即刻放进酶标仪测读：450nm测定波长和630nm参考波长（注意：不宜超过15分钟）
19． 使用酶标仪软件，选择拟合数学模型之一，计算样品8-羟基脱氧鸟苷浓度（纳克/毫升）
1） 四参数LOGISTIC回归
2） LOGIT-LOG线性回归
3） 三次多项式方程
4） 四参数方程
注意事项
1． 本产品为20次操作量
2． 本产品检测敏感度达0.1纳克/毫升
3． 操作时，须戴手套
4． 系统操作时，标准样品测定只需一次
5． 孵育时，须避免光照
6． 加样时确保加入孔底，避免溅出和气泡
7． 注意加样时，避免交叉污染，避免污染母液
8． 建议使用湿度充分的培养箱
9． 用户根据实际用量，配制HEPENGBIO底物工作液；须新鲜配制，即刻使用
10． 建议染色完成后，即刻进行比色分析
11． 本公司提供系列线粒体DNA损伤检测试剂产品
本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
