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技术文章
酵母细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒产品说明书
点击次数：2661 发布时间：2024/7/22 11:52:15
HEPENGBIO酵母细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO酵母细胞可溶性总蛋白质制备试剂是一种旨在使用化学和物理方法相结合，快速且充分裂解酵母细胞，并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下，通过超速离心，收集所有细胞内可溶性蛋白质的方法。可直接用于后续蛋白电泳（SDS-PAGE）、西方杂交（Western blotting）、免疫沉淀（immunoprecipitation）、凝胶迁移率变动分析（gel mobility shift）、 DNA蛋白质相互作用分析（DNA-protein interaction）、酶活性分析（enzymatic activity analysis）、蛋白质相互作用分析（protein-protein interaction）、特异性表达识别（specific expression identification）和质谱分析等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取效果好。
技术背景
通过特殊裂解液和蛋白酶抑制混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化内源性蛋白酶的破坏，充分保留细胞内蛋白质的免疫和生物学活性。
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 500毫升
HEPENGBIO裂解液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO活性液（Reagent C） 50微升
GENEMD酸珠液（Reagent D） 4毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里； 6月
用户自备
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
超速离心机：用于蛋白收集
实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的HEPENGBIO活性液（Reagent C）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，然后移出500微升HEPENGBIO裂解液（Reagent B）到1.5毫升离心管，加入2.5微升HEPENGBIO活性液（Reagent C），充分混匀，置于冰槽里，标记为HEPENGBIO裂解工作液。然后进行下列操作。
1． 准备好50毫升新鲜酵母样品（通过选择性培养液培养获得真菌/酵母细胞）
2． 在分光光度仪上测OD600为1（1 OD＝1 X 107细胞/毫升；总量为5 X 108细胞）
3． 转移到预冷的50毫升锥形离心管
4． 放入4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入25毫升HEPENGBIO清理液（Reagent A），混匀
7． 放入4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g
8． 小心抽去上清液
9． 加入500微升含有HEPENGBIO裂解液（Reagent B）和HEPENGBIO活性液（Reagent C）的HEPENGBIO裂解工作液
10． 加入200微升GENEMD酸珠液（Reagent D）
11． 在4℃环境下，强力涡旋震荡15分钟
12． 放入4℃台式离心机离心10分钟，速度为9000g
13． 小心移取上清液（500微升）到新的1.5毫升离心管
14． 放入4℃微型台式离心机离心30分钟，速度为16000g
15． （选择步骤）如果上清液不够澄清，放入4℃超速离心机离心150分钟，速度为250000g
16． 小心移取上清液（300微升）到新的1.5毫升离心管
17． 放进－70℃的冰箱里备用
18． 或放入冰槽里，继续各种后续（西方杂交、免疫沉淀等）操作
注意事项
1． 本产品为20次操作
2． 所有操作均须在4℃状态下进行
3． 细胞生长切莫过度，否则影响蛋白表达和细胞裂解
4． 50毫升（OD600＝1）菌液湿重约1克
5． HEPENGBIO活性液（Reagent C）避免反复冻融
6． HEPENGBIO酸珠液（Reagent D）为固体状，移取方法为：使用1毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用0.5毫升PCR管的盖子内圈盛满；或秤重0.1克
7． 本产品按照50毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量，可相应调整试剂用量，即100毫升菌液，1毫升裂解工作液；200毫升菌液，2毫升裂解工作液等
8． 50毫升（OD600＝1）菌液可获得2至5毫克总蛋白
9． 制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，严格避免反复冻融
本公司提供系列真菌/酵母试剂产品
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
