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技术文章
葡萄糖 (Glucose) (GOPOD 氧化酶法) 含量试剂盒说明书 (货号：HP-A504F 分光法 48 样)实验步骤参考说明书
点击次数：2670 发布时间：2024/7/22 11:44:27
葡萄糖(Glucose) (GOPOD 氧化酶法) 含量试剂盒说明书
(货号：HP-A504F 分光法48样)
一、产品简介：
葡萄糖(C6H12O6,FW: 180. 16)，是产生能量分子ATP的主要来源。本试剂盒提供一种 定量、快速、简单、灵敏的检测方法，葡萄糖被特异性氧化以产生与显色剂反应的(粉) 红色产物，该产物在520nm有最大吸收峰，进而得到葡萄糖含量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 粉体mg×1瓶 | -20℃保存 | 临用前加4.2mL 的蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 液体36mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
标准管 |
粉体mg×1支 |
室温干燥 保存 | 用前准确称取2mg 粉体即葡萄糖至 一新 EP 管中，再加2mL 蒸馏水充分 溶解即得1mg/mL 标准品，再用蒸馏 水稀释成0.5mg/mL，待用。(该标准 品粉体开封后也需干燥保存和使用) |
三、所需仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm) 、天平、移液器、研钵、离心机、蒸馏水。
四、葡萄糖含量检测：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
0.1g 组织样本(水分充足的样本建议取0.2g 左右) ，加1mL 的蒸馏水研磨，粗提 液全部转移到EP 管中，12000rpm ，常温离心10min ，上清液待测。
②细胞样本：
先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细胞加入1mL 蒸馏水或PBS 或 生理盐水，超声波破碎细胞(冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次)；12000rpm 4℃离心10min ，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细胞数量(104)：提取液(mL)为500~ 1000：1的比例进行提取。
③ 液体样品：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则需离心后取上清液测定。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热30min ，设置温度在25℃，设定波长到520nm ，蒸馏水调零。
② 做实验前选取2个样本，找出适合本次检测样本的稀释倍数D 。如：果实类样本， 需稀释5- 10倍。
③ 在EP 管或1mL 玻璃比色皿(光径1cm) 中依次加入：
试剂名称 (μL) | 测定管 | 空白管 (仅做一次) | 标准管 (仅做一次) |
样本 | 40 |
|
|
蒸馏水 |
| 40 |
|
标准品 |
|
| 40 |
试剂一 | 80 | 80 | 80 |
试剂二 | 680 | 680 | 680 |
混匀，37℃避光反应30min ，520nm 下读取吸光值A， △A 葡萄糖=A 测定-A 空白。 |
【注】：1.若待检测样本有强背景色(如粉色，红色等) ，需做一个样本自身对照：即10μL 样本+20μL 蒸
馏水+170μL 试剂二，37℃避光反应30min ，520nm 下读取吸光值A ，△A 葡萄糖=A 测定-A 对照。
2. 测定管的A 值若超过1.5，可把样本用蒸馏水进行稀释，稀释倍数D 代入计算公式。
五、结果计算：
1、按照质量计算：
葡萄糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准×V1) ×△A 葡萄糖÷(A 标准-A 空白)÷(W×V1÷V) ×D=0.5×△A 葡萄糖÷(A 标准-A 空白)÷W×D
2 、按照细胞数量计算：
葡萄糖含量(mg/ 104cell)=(C 标准×V1) ×△A 葡萄糖÷(A 标准-A 空白)÷(500×V1÷V) ×D=0.5×△A 葡萄糖÷(A 标准-A 空白) ÷500×D
3、按照体积计算：
葡萄糖含量(mg/mL)=(C 标准×V1) ×△A 葡萄糖÷(A 标准-A 空白)÷V1×D
=0.5×△A 葡萄糖÷ (A 标准-A 空白)×D
C 标准---葡萄糖标准品的浓度，0.5mg/mL； D---稀释倍数，未稀释即为1；
V---加入提取液体积，1mL； V1---加入样本体积，0.04mL；
W---样本鲜重，g； 500---细胞数量，万。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
