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技术文章
α-淀粉酶 ( α-AMY) 检测试剂盒 (EPS-G7 法)说明书 (货号：HP-A239W48微板法 48 样)注意事项有哪些？
点击次数：2698 发布时间：2024/7/18 15:14:14
α-淀粉酶(α-AMY) 检测试剂盒 (EPS-G7 法) 说明书
(货号：HP-A239W48 微板法48样)
一、产品简介：
本法使用亚乙基阻断的对硝基苯麦芽糖苷为底物，α-淀粉酶将底物水解为乙基麦芽糖(Et-Gx) 和对硝 基苯麦芽糖(Gy-pNP) ，Gy-pNP 可被α-葡萄糖苷酶水解为葡萄糖和对硝基(pNP)-葡糖糖苷。淀粉酶 水解反应和α-葡萄糖苷酶作用的最终结果是产生自由的对硝基苯酚(p-NP) 。p-Np 在405nm 波长处有 特征吸收峰，其吸光度的变化与样本中α-淀粉酶的活性呈正相关。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 液体7.5mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
试剂二 | 液体2.5mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
标准管 | 液体0.2mL×1支 | 4℃保存 | 浓度为324U/L。 |
三、所需仪器和用品：
酶标仪、96孔板、可调式移液器、离心机、蒸馏水。
四、α-淀粉酶(α-AMY) 检测：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 血清或肝素抗凝血浆。标本稳定性：2℃-25℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定1年。
② 不可使用溶血标本。
③ 可检测尿液样本：在尿液中的稳定性：20℃-25℃保存可稳定2天；2℃-8℃保存可稳定10天； -20℃保存可稳定3周；
2、上机检测：
① 酶标仪预热30min ，设定波长到 405nm。
② 所有试剂解冻至室温，在96孔板中依次加入：
试剂名称(μL) | 测定管 | 标准管 (仅做一次) | 空白管 (仅做一次) |
样本 | 7 |
|
|
蒸馏水 |
|
| 7 |
标准品 |
| 7 |
|
试剂一 | 140 | 140 | 140 |
37℃条件下，孵育5min。 | |||
试剂二 | 50 | 50 | 50 |
混匀，37℃条件下，1min 时于405nm 处读取吸光值A1，6min 时 读取A2。ΔA＝A2-A1。 | |||
【注】：1.若A2值大于1，可用生理盐水或蒸馏水对样本进行稀释，稀释倍数D 代入计算公式。
2.若△A 值小于0.01，可增加样本加样体积V1 (如由7μL 增至20μL ，空白管也由7μL 增 至20μL 蒸馏水，标准管是7μL 标准品和13μL 蒸馏水；其他试剂均保持不变) 。则改变后 的V1代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、按照体积计算：
α-淀粉酶(α-AMY) (U/L)=(C 标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷ (A 标准-A 空白)÷V1×D
=324×(A 测定-A 空白)÷(A 标准-A 空白)×D
C 标准---标品浓度，324U/L ； V2---加入标准品体积，0.007mL； 精密度：重复性CV 不大于5％；
V1---加入样本体积，0.007mL；
D---稀释倍数，未稀释即为1；
批间相对极差R 不大于5％。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
