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技术文章
土壤α-木糖苷酶 (Solid-β- xylosidase) 测定试剂盒说明书 ( 分光法 24 样)@分析方法
点击次数：2707 发布时间：2024/7/18 15:13:03
土壤α-木糖苷酶(Solid-β- xylosidase) 测定试剂盒说明书
( 分光法24样)
一、产品简介：
α-木糖苷酶(EC 3.2.1.177)是一类木聚糖降解水解酶，存在于微生物等生物体，促使非 还原末端α-D-木糖残基的水解，释放出α-D-木糖。
土壤中α-木糖苷酶催化对硝基苯酚-α-D-木糖苷产生对硝基苯酚(PNP) ，该产物在 405nm 处有特征吸收峰，通过测定405nm 光吸收增加速率，即可计算土壤α-木糖苷酶活 性。
二、试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
试剂一 | 粉剂 mg×1支 | 4℃保存 | 用前甩几下使试剂落入底部， 再加2mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 液体15mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
试剂三 | 液33mL×1瓶 | 4℃保存 |
|
标准品 | 粉剂×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂。 |
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径1cm) 、可调式移液器、天平、低温离心 机、蒸馏水。
四、土壤α-木糖苷酶活性测定：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！
1 、样本的制备：
取新鲜土样风干或者37℃烘箱风干，先粗研磨，过40目筛网备用。 【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；土壤过筛，保证取样的均匀细腻；
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至405nm ，蒸馏水调零。
②在 EP 管中依次加入：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | ||
风干土样(g) | 0.2 | 0.2 | ||
试剂一(μL) | 75 |
| ||
蒸馏水 |
| 75 | ||
试剂二(μL) | 165 | 165 | ||
混匀， 40℃振荡反应30min | ||||
试剂三(μL) | 660 | 660 | ||
混匀，12000rpm，离心10min,取全部上清液转移至1mL玻璃比色皿中，405nm 下读取吸光值A ，△A=A 测定-A 对照(每个样本需做一个自身对照)。 | ||||
【注】：1.若ΔA 过小，可以增加土样量或延长保温时间(如：60min 或更长) ，重新调整的 样本量W 和反应时间T 需代入计算公式重新计算。
2.若A 测定超过1.5，可以减少土样量或降低保温时间(如：10min ) ，重新调整的 样本量W 和反应时间T 需代入计算公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线方程：y=0. 1215x+0.0036；x 为标准品质量(μg)，y 为吸光值ΔA。
2、单位定义：每小时每克土样中产生1μg 对-硝基苯酚(PNP) 定义为一个酶活力单位。 土壤α-木糖苷酶活性(μg/h/g 土样)=(ΔA-0.0036) ÷0. 1215÷W÷T
= 16.5×(ΔA+0.0058)÷W
T----反应时间，30min=0.5h；
PNP 相对分子质量--- 139. 11。
W---实际称取干土质量，g；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液(1mg/mL)： 向标准品EP 管里面加入1ml 蒸馏水。
2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0. 1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5mg/mL 。也可根据实际 样本来调整标准品浓度。
3 在EP 管加入：60μL 标准品+15μL 蒸馏水+165μL 试剂二+660μL 试剂三，混匀，取 全部上清液转移至1mL 玻璃比色皿中，于405nm 下读取吸光值。
4 根据结果制作标准曲线。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
