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技术文章
特殊石蜡切片总胆固醇高氯酸萘醌（PAN）直接染色试剂盒产品说明@主要用途
点击次数：2681 发布时间：2024/7/18 11:28:59
HEPENGBIO特殊石蜡切片总胆固醇高氯酸萘醌（PAN）直接染色试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO特殊石蜡切片总胆固醇高氯酸萘醌（PAN）直接染色试剂是一种旨在通过特殊脱蜡处理和三氯化铁氧化预处理技术，进而使用高氯酸萘醌特异性与胆固醇反应，形成灰蓝色沉积，分析石蜡包埋组织切片中（大程度保留的）总胆固醇的方法。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片中总胆固醇的检测。广泛用于组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色敏感。
技术背景
胆固醇（cholesterol）是一类称之为固醇类（sterols）或聚类异戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多环化合物（polycyclic compound）。其分子式为cholest-5-en-3β-ol。胆固醇以游离（free form）和脂化结合（ester）两种形式广泛存在于所有动物组织中，主要以非脂化形式存在于细胞膜中。在膜功能和脂代谢以及激素合成中起着重要作用。高氯酸萘醌（perchloric acid-naphthoquinone；PAN）染色技术通过三氯化铁氧化预处理，然后使用高氯酸萘醌还原游离和结合胆固醇，呈现灰蓝色色素沉积。由于石蜡包埋的组织切片在去石蜡的过程中，有机溶剂诸如二甲苯等容易破坏和减少组织中的胆固醇成分，因此使用非二甲苯类脱蜡，以大程度保护组织中的胆固醇成分是高氯酸萘醌染色的关键。
产品内容
HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A） 50毫升
HEPENGBIO净化液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO清理液（Reagent C） 50毫升
HEPENGBIO预处理液（Reagent D） 20毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent E） 20毫升
HEPENGBIO封片液（Reagent F） 5毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO预处理液（ReagentD）和HEPENGBIO染色液（ReagentE），避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；6月
用户自备
毛笔：用于图刷样品表面染色
烘箱：用于烘干样品表面
光学显微镜：用于样品染色后观察分析
实验步骤
一、样品脱蜡处理
1． 取出待测的6微米厚的石蜡包埋的组织切片
2． 小心加上500微升HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：使用前，摇匀脱蜡液）
3． 放进70℃恒温培养箱里孵育5分钟
4． 即刻小心移去切片上的HEPENGBIO脱蜡液（Reagent A）
5． （选择步骤）重复实验步骤2至4一次
6． 小心加上200微升HEPENGBIO净化液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
7． 室温下孵育2分钟
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO净化液（Reagent B）
9． 进一步依次常规净化处理：用户自备的100%乙醇、70%乙醇、50%乙醇
10． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面
11． 室温下孵育3分钟
12． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent C）
二、样本染色处理
1． 小心加上200微升HEPENGBIO预处理液（ReagentD），铺满整个切片样品表面
2． 室温下孵育4小时，避免光照和干化（注意：如果胆固醇含量较低，建议孵育3天）
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO预处理液（ReagentD）
4． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗样品表面
5． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
6． 重复实验步骤4至5二次
7． 使用洁净的毛笔置于HEPENGBIO染色液（ReagentE）里蘸湿
8． 轻轻涂抹切片样品表面两次
9． 放进70℃烘箱里孵育2分钟，或直至呈现灰蓝色
10． 室温下冷却5分钟
11． 小心加上100微升HEPENGBIO封片液（ReagentF）
12． 即刻放上盖玻片
13． 在一般光学显微镜下观察：胆固醇阳性呈现灰蓝色
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 试剂含有腐蚀性酸性物质，注意操作安全
3． 建议用户避免使用常规石蜡包埋组织切片，即石蜡包埋前避免二甲苯等透明处理
4． 操作时，须戴手套
5． 操作时，避免污染母液
6． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
7． 在烘箱孵育时，HEPENGBIO染色液（ReagentE）涂抹可以重复
8． 样品染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
9． 染色后数小时，甚至数十分钟，染色会褪色甚至消失
10． 本公司提供系列组织细胞胆固醇染色试剂产品
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
