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技术文章
HEPENGBIO冰冻切片总游离胆固醇菲律宾（FILIPIN）荧光染色试剂盒实验步骤参考说明书
点击次数：2731 发布时间：2024/7/18 11:06:46
HEPENGBIO冰冻切片总游离胆固醇菲律宾（FILIPIN）荧光染色试剂盒
产品说明书
主要用途
HEPENGBIO冰冻切片总游离胆固醇菲律宾（FILIPIN）荧光染色试剂是一种旨在通过荧光染料菲律宾（FILIPIN）特异性与胆固醇结合，形成复合体，并产生蓝色荧光现象的技术方法。主要适用于冰冻切片组织游离胆固醇分布的检测。广泛用于组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
胆固醇（cholesterol）是一类称之为固醇类（sterols）或聚类异戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多环化合物（polycyclic compound）。其分子式为cholest-5-en-3β-ol。胆固醇以游离（free form）和脂化结合（ester）两种形式广泛存在于所有动物组织中，主要以非脂化形式存在于细胞膜中。在膜功能和脂代谢以及激素合成中起着重要作用。菲律宾（FILIPIN）是一类由四种同分异构体的多烯抗生素（polyeneantibiotics）或多马霉素（polyene macrolide）的总称。源自于S. FILIPINENSIS细菌的培养液中。其分子式为C35H58O11，分子量为654.8。菲律宾与胆固醇结合形成聚集体或复合物。
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 100毫升
HEPENGBIO固着液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO抗干扰液（Reagent C） 10毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent D） 5毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；保证6月
用户自备
荧光显微镜：用于样品染色后观察分析
实验步骤
一、 样本固着处理
1． 取出待测的5至10微米厚的冰冻切片（注意：使用快速冷冻处理－snap frozen的冰冻切片，不宜使用包埋处理）
2． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
4． 重复实验步骤2至3二次
5． 小心加上200微升HEPENGBIO固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
6． 室温下孵育30分钟
7． 小心移去切片上的HEPENGBIO固着液（Reagent B）
8． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗样品表面
9． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
10． 重复实验步骤8至9二次
二、样本染色处理
1． 小心加上200微升HEPENGBIO抗干扰液（Reagent C），铺满整个切片样品表面
2． 室温下孵育10分钟
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO抗干扰液（Reagent C）
4． 小心加上100微升HEPENGBIO染色液（Reagent D），铺满整个切片样品表面
5． 室温下孵育30分钟，避免光照
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色液（Reagent D）
7． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗样品表面
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
9． 重复实验步骤7至8二次
10． 即刻放上盖玻片或封片
11． 在荧光显微镜下观察：激发波长：340nm；散发波长：430nm――胆固醇阳性呈现蓝色荧光
注意事项
1． 本产品为50次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 操作时，避免污染母液
4． 试剂溶液在样品表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满样品表面
5． 样品染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
6． 荧光容易受到光漂白（photobleach），建议使用HEPENGBIO荧光或共聚焦显微镜制片封片处理液+HEPENGBIO抗淬灭剂Ⅰ
7． 本产品染色后，可用于电镜分析
8． 本公司提供系列组织细胞生物化学成分染色试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰
本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
