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技术文章
HEPENGBIO冰冻切片溶酶体形态/活性荧光染色试剂盒注意事项有哪些？
点击次数：2685 发布时间：2024/7/18 11:04:28
HEPENGBIO冰冻切片溶酶体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO冰冻切片溶酶体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在溶酶体，并呈现红色，用于分析和观察溶酶体形态以及双重染色或重叠染色定位的方法。其适用于各种冰冻切片组织（动物、人体等）溶酶体的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定，滞留持久。
技术背景
溶酶体（lysosome）是一种普遍存在于真核细胞中的细胞器，含有酸性水解酶，例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等，分解各种细胞残渣和废弃物质，包括过多的或破损的其它细胞器、食物颗粒、吞噬的细菌和病毒等。其大小为0.5至1.5微米，球圆形，溶酶体内pH为5.0左右。溶酶体功能异常会引起溶酶体贮积症（1ysosomal storage disorders；LSDs），例如家族性白痴病（Tay-sachs disease）和庞贝氏症 （Pompe’s disease）。溶酶体荧光探针LysoTracker RED，是一种向酸性（acidotropic）探针，含有荧光基团在弱碱上，高度选择性地染色酸性细胞器溶酶体。探针自由通过细胞膜，选择性地聚集在溶酶体内。它可以对活细胞进行直接染色，在590nm波长可以清晰看到被染成红色的溶酶体。
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 50毫升
HEPENGBIO固着液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO预备液（Reagent C） 5毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent D）100微升
产品说明书 1份
保存方式
保存HEPENGBIO染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；保证6月
用户自备
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于组织细胞荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后分别移出200微升HEPENGBIO预备液（Reagent C）和5微升HEPENGBIO染色液（Reagent D）到新的1.5毫升离心管，标记为HEPENGBIO染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。
1．准备待测的厚为10微米的未经固着处理的冰冻切片
2． 小心加上500微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），覆盖切片表面
3． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
4． 小心加上500微升HEPENGBIO固着液（ReagentB），覆盖切片表面
5． 室温下孵育10分钟
6． 小心移去切片上的HEPENGBIO固着液（Reagent B）
7． 小心加上500微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），覆盖切片表面
8． 小心移去切片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
9． 小心加上200微升含有HEPENGBIO预备液（Reagent C）和HEPENGBIO染色液（Reagent D）的HEPENGBIO染色工作液到切片上，覆盖切片表面
10． 放进37℃细胞培养箱里孵育30分钟
11． 小心移去切片上的HEPENGBIO染色工作液
12． 小心加上500微升新鲜的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
13． 小心移去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
14． 盖上盖玻片
15． 即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长577nm，散发波长590nm（溶酶体呈现红色）
注意事项
1． 本产品为20次操作
2． 操作时，避免污染母液
3． 操作时，须戴手套
4． 染色前，所有试剂溶液（除HEPENGBIO染色液外）需37℃预热
5． 建议组织细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析
6． 孵育时，必须避免光照
7． 根据不同组织细胞类型，调整HEPENGBIO染色工作液的使用浓度，避免过度染色
8． 本产品友好使用于双重染色或重叠染色
9． 本公司提供系列溶酶体分析试剂产品
本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
