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技术文章
HEPENGBIO细胞特恩布尔（TURNBULL）铁（二价）染色试剂盒产品说明书技术背景
点击次数：2716 发布时间：2024/7/18 11:01:42
HEPENGBIO细胞特恩布尔（TURNBULL）铁（二价）染色试剂盒产品说明书
主要用途
HEPENGBIO细胞特恩布尔（TURNBULL）铁（二价）染色试剂是一种旨在使用氰正铁酸盐结合反应技术，分析细胞样品中二价亚铁离子（ferrous ion）沉积现象的方法。主要适用于各种细胞样品中的二价亚铁离子检测。广泛用于血液细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景
二价铁（ferrous）是氧化数为二的铁。二价铁溶解性好，生物学效价优于三价铁，因此铁首先应被还原为二价铁，才容易被生物体吸收利用。动物和人体的整个消化道都可以吸收，植物在根尖处吸收。机体大约有三分之二的铁存在于红细胞的血红蛋白和肌肉的肌红蛋白中，20％的铁以不同形式存在于肝、脾和其他组织中。铁作为氧的载体，保证组织内氧的正常输送，在细胞生物氧化和能量代谢过程中发挥着重要作用。 通过酸性氰正铁酸盐（ferricyanide）与细胞中二价正铁离子（ferrous ion）结合，成为铁氰亚铁（ferrous ferricyanide），而呈现不溶性亮蓝色色素，又称为特恩布尔蓝或腾氏蓝（turnbull blue）。其反应原理如下：
HCl
3Fe2+ + 2K3Fe（CN）6 → Fe3[（FeCN）]2 + 6K+
产品内容
HEPENGBIO清理液（Reagent A） 30毫升
HEPENGBIO固着液（Reagent B） 10毫升
HEPENGBIO染色液（Reagent C） 5毫升
HEPENGBIO酸性液（Reagent D） 5毫升
HEPENGBIO饱和液（Reagent E） 10毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里；HEPENGBIO染色液（Reagent C），避免光照；试剂具有腐蚀性和毒性，注意操作安全；6月
用户自备
核固红复染试剂盒（HEPENGBIO40011）：用于常规染色后复染
2毫升离心管：用于染色工作液配制的容器
小型染色缸：用于细胞染色操作
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析
实验步骤
操作一：细胞载玻片染色
一、 样本固着处理
1． 取出待测的细胞载玻片或细胞涂片
2． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）在载玻片上，铺满整个样品表面
3． 小心移去载玻片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
4． 小心加上200微升HEPENGBIO固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
5． 室温下，孵育10分钟
6． 小心移去载玻片上的HEPENGBIO固着液（Reagent B）
7． 小心加上200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗样品表面
8． 小心移去载玻片上的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
9． 重复实验步骤7至8一次
二、样本染色处理
操作开始前，将4℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（ReagentC）和HEPENGBIO酸性液（ReagentD）置入室温下，分别移出1毫升到2.2毫升离心管，混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，用锡箔纸包裹，避免光照。然后进行下列操作。
1． 小心加上200微升HEPENGBIO染色工作液，铺满整个载玻片样品表面
2． 室温下孵育60分钟；或直至可见篮色
3． 小心移去载玻片上的HEPENGBIO染色工作液
4． 小心加上200微升HEPENGBIO饱和液（ReagentE），清洗样品表面
5． 小心移去载玻片上的HEPENGBIO饱和液（ReagentE）
三、 样本复染处理
1． （选择步骤）样本复染处理（核固红）
2． 放上盖玻片或封片
3． 即刻在一般光学显微镜下观察：二价铁沉积阳性细胞呈现亮蓝色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）
操作二：24孔细胞培养板染色
一、 样本固着处理
1． 小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
2． 每孔加入400微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
3． 小心抽去每孔里的HEPENGBIO清理液（Reagent A）
4． 每孔加入400微升HEPENGBIO固着液（Reagent B），覆盖整个细胞表面
5． 在室温下孵育10分钟
6． 小心抽去每孔里的HEPENGBIO固着液（Reagent B）
7． 每孔加入400微升HEPENGBIO清理液（Reagent A），清洗细胞表面
8． 小心抽去HEPENGBIO清理液（Reagent A）
9． 重复实验步骤7至8一次
二、样本染色处理
操作开始前，将4℃冰箱里的试剂盒中的HEPENGBIO染色液（ReagentC）和HEPENGBIO酸性液（ReagentD）置入室温下，分别移出1毫升到2.2毫升离心管，混匀后，标记为HEPENGBIO染色工作液，用锡箔纸包裹，避免光照。然后进行下列操作。
1． 每孔加入400微升HEPENGBIO染色工作液，覆盖整个细胞表面
2． 室温下孵育30分钟；或直至可见篮色
3． 小心抽去HEPENGBIO染色工作液
4． 每孔加入400微升HEPENGBIO饱和液（ReagentE），清洗细胞表面
5． 小心抽去HEPENGBIO饱和液（ReagentE）
三、 样本复染处理
1． （选择步骤）样本复染处理（核固红）
2． 小心加入200微升HEPENGBIO清理液（Reagent A）
3． 即刻在一般光学显微镜下观察：三价铁沉积阳性细胞呈现亮蓝色（如果复染：细胞质呈现粉红色，细胞核呈现红色）
注意事项
1． 本产品为50次（细胞载玻片）和25次（1个24孔板）操作
2． 本产品可以用来鉴别组织或细胞中出现黄棕色的色素是属于那一种，如是含铁血黄素，可证明是何价位的铁离子，如肺郁血、出血、陈旧的出血灶、肝硬化时慢性脾郁血、硬化性血管瘤、动脉瘤性骨囊肿、绒毛血素滑膜炎等
3． 操作时，须戴手套和防护面罩
4． 建议在通风柜里操作
5． 所有操作在室温下进行
6． 试剂具有腐蚀性和毒性，注意操作安全
7． 每次更换试剂溶液时，保持载玻片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
8． 试剂溶液在载玻片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满载玻片表面
9． 样品染色避免过度，肉眼可见蓝色即可终止染色
10． 建议使用HEPENGBIO核固红复染试剂盒
11． 组织细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
12． 本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品
本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
