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技术文章
β-木糖苷酶（β- xylosidase）测定试剂盒说明书 微量法 100T/48S
点击次数：2758 发布时间：2020/9/21 10:46:34
β-木糖苷酶（β- xylosidase）测定试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的
关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂
应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
测定原理：
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸
收峰，测定 405nm 光吸收增加速率，可计算 β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 1mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7
秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 405nm。
2、操作表
对照管 测定管
酶液（μL） 40 40
试剂一（μL） 10
试剂二（μL） 80 70
混匀，45℃水浴 20min
试剂三（μL） 80 80
混匀，静置 5min， 微量石英比色皿/96 孔板，对照管调零，测定 405nm 吸光值，记为 A405。
β-木糖苷酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=3.34x-0.001，R
2
=0.9991
1、按蛋白浓度计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一
个酶活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=
3.34 138
0.001 405
A
×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000
= 542.4×(A405+0.001)÷ Cpr
2、按样本重量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶
活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min/g）=
3.34 138
0.001 405
A
×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000
= 542.4×(A405+0.001)÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 104个细胞 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一
个酶活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min/104
cell）=
3.34 138
0.001 405
A
×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万
个）÷T×1000= 542.4×(A405+0.001) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一个
酶活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=
3.34 138
0.001 405
A
×V 反总÷V 样÷T×1000
= 542.4×(A405+0.001)
V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，
0.04mL；138：对硝基苯酚分子量；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：
反应时间，20min；1000:1mmol/L=1000μmol/L
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=1.67x-0.001，R
2
=0.9991
（1）按蛋白含量计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1nmol 对硝基苯酚的酶量为一
个酶活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min /mg prot）=
1.67 138
405 0.001
A
×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T×1000
=1084.8×(A405+0.001)÷ Cpr
（2）按样本重量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品 1min 内催化产生 1nmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶
活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min /g）=
1.67 138
405 0.001
A
×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T×1000
=1084.8×(A405+0.001)÷W
（3）按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 104个细胞 1min 内催化产生 1nmol 对硝基苯酚的酶量为一
β -木糖苷酶活性（nmol/min /104
cell）=
1.67 138
405 0.001
A
×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万
个）÷T×1000 =1084.8×(A405+0.001) ÷ 细胞数量（万个）
（4）按液体体积计算:
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫升液体 1min 内催化产生 1 nmol 对硝基苯酚的酶量为一个
酶活单位。
β -木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=
3.34 138
0.001 405
A
×V 反总÷V 样÷T×1000
=1084.8×(A405+0.001)
V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，
0.04mL；138：对硝基苯酚分子量；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：
反应时间，20min；1000:1mmol/L=1000μmol/L
注意事项：
1、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参
与计算的稀释倍数要相应改变。
2、样品蛋白质含量需要另外测定，可选用考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒进行测定。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
