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技术文章
酸性木聚糖酶测定试剂盒说明书 微量法 100T/48S
点击次数：2713 发布时间：2020/9/21 10:45:04
酸性木聚糖酶（Acidic Xylanase，ACX）测定试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素
酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进
有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应
用于酿造和饲料工业中，ACX 一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。
测定原理：
ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二
硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还
原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 ACX 活力。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏
水。
试剂组成和配制：
缓冲液：液体 65mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
粗酶提取：
1. 发酵液：发酵液于 8000g，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。
2. 酶干粉：称约 0.1mg，加 1mL 缓冲液溶解待测。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 540nm。
2、操作表
对照管 测定管
样品（μL） 60 60
缓冲液（μL） 90 90
试剂一（μL） 60
试剂二（μL） 90
混匀，50℃水浴中反应 30min，立即沸水浴中 10min 灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进
水，改变了反应体系)
试剂一（μL） 60
试剂二（μL） 90
混匀，沸水浴显色 5min，取 200µL 于微量石英比色皿/96 孔板中，对照管调零，测定 A540。
ACX 计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 2.5554x - 0.002 ，R
2
= 0.9983
1. 发酵液 ACX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的
酶量为一个酸性性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（nmol/min/mL）= （A540+0.002）÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×1000
= 435× (A540+0.002)
2. 酶干粉 ACX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶
量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（nmol/min/mg）= （A540+0.002）÷2.5554÷150÷T×稀释倍数×1000÷W
= 435×(A540+0.002 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=300µL÷60µL=5；
1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μmol/L；W：样本质量，mg
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.2777x - 0.002 ，R
2
= 0.9983
1. 发酵液 ACX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的
酶量为一个酸性性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（nmol/min/mL）=（A540+0.002）÷1.2777÷150÷T×稀释倍数×1000
= 870× (A540+0.002)
2. 酶干粉 ACX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量
为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（nmol/min/mg）=（A540+0.002）÷1.2777÷150÷T×稀释倍数×1000÷W
= 870× (A540+0.002 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V 反总÷V 样=300µL÷60µL=5；
1000：转化因子，即 1mmol/L =1000μmol/L ；W：样本质量，mg
注意事项
1. 吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参
与计算的稀释倍数要相应改变。
2. 试剂盒 2-8℃保存，保质期 3 个月，建议尽快使用。
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
