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技术文章
山梨醇含量试剂盒说明书 微量法 100 管/96 样
点击次数：2691 发布时间：2020/9/21 10:23:28
山梨醇含量试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
山梨醇广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是糖运输形式之一，而且与生物
抗逆性和食物风味密切相关。因此，在糖代谢、抗逆性和食品研究中经常需要检测山梨醇含
量变化。
测定原理：
山梨醇在碱性溶液中与铜离子形成蓝色络合物，在 655nm 波长有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：液体 3.5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 3.5mL×1 瓶 ，4℃保存。
山梨醇的提取：
按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL
蒸馏水），研磨成匀浆，95℃水浴 10 分钟（盖紧，以防止水分散失），冷却后，8000g，25
℃离心 10min，取上清液待测。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 655nm，蒸馏水调零。
2、加样表（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL） 空白管 测定管
试剂一 35 35
试剂二 35 35
样本 230
蒸馏水 230
混匀后室温静置 15min，8000g，25℃离心 10min，取 200μL 上清液至微量石英比色皿或 96
孔板中，测 655nm 下吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。
山梨醇含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.352x - 0.002；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、按照样品质量计算
山梨醇含量（mg /g 鲜重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷W
3、按照样本蛋白浓度计算
山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr
V1：加入样本体积，0.23mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.176x - 0.002；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
2、按照样品质量计算
山梨醇含量（mg /g 鲜重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W
3、按照样本蛋白浓度计算
山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷Cpr
V1：加入样本体积，0.23mL；V2：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
W：样本质量，g
注意：低检测限为 1μg/g 鲜重或 0.01μg /mg prot
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
