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技术文章
植物组织果糖（fructose ，FT）含量试剂盒说明书 微量法 100 管/96 样
点击次数：2768 发布时间：2020/9/18 16:29:35
植物组织果糖（fructose ，FT）含量试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
果糖是一种为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁
和蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品
中。
测定原理：
在酸性条件下果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、蒸馏水
试剂的组成和配制：
提取液：液体 100ml×1 瓶，4℃保存；
试剂一：1mg/mL 标准液 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 25ml×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 6ml×1 瓶， 4℃保存；
试剂四：粉剂 0.5g×1 瓶，常温保存。
果糖提取：
称取 0.1~0.2g 样本，常温研碎；加入 0.5mL 提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；
置于 80℃水浴锅中 10min（盖紧，以防止水分散失），振荡 3~5 次，冷却后，4000g，25℃
离心 10min，取上清；加入少量（约 2mg）试剂四，80℃脱色 30min（盖紧，以防止水分散
失）；再加入 0.5mL 提取液，4000g，25℃离心 10min，取上清液测定。
测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。
2、样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）：
试剂（μL） 空白管 标准管 测定管
样本 30
试剂一 30
蒸馏水 30
试剂二 210 210 210
试剂三 60 60 60
混匀，95℃水浴反应 30min（盖紧，以防止水分散失），冷却后取 200μL 至微量石英比色皿
或 96 孔板中测定 480nm 处光吸收值，空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。
空白管和标准管只要做一管。
果糖含量计算：
1、果糖含量(mg/mg prot）=（C 标准管×V1）×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷（A2-A1)
÷Cpr
此法需要自行测定蛋白浓度。
2、果糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准管×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(W×V1÷V2)= (A3-A1)
÷(A2-A1) ÷W。
C 标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.03mL；V2：加入提取液体积，1mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
注意：低检测限为 100ng/g 鲜重或 1ng/mg prot
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
