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技术文章
脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）试剂盒说明书 微量法 100T/48S
点击次数：2788 发布时间：2020/9/18 16:17:35
脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase，LPL）试剂盒说明书
微量法 100T/48S
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
脂蛋白酯酶是脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、乳腺细胞及巨噬细胞等实质细胞合成的
一种酶，可催化甘油三脂水解为脂肪酸和单酸甘油酯，以供组织氧化供能和贮存，并在不
同的组织表现出不同的生理意义。
测定原理
脂蛋白酯酶水解 4-硝基苯棕榈酸酯产生 4-硝基苯酚，在 400nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
试剂组成和配制
试剂一：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
样品处理
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入
1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500
万细胞加入 1mL 试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，
间隔 7 秒，总时间 3min）；然后于 4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。
3. 血清：直接测定。
测定操作
对照管 测定管
样品（μL） 20 20
试剂一（μL） 80
试剂二（μL） 80
混匀，45℃水浴 10min
试剂三（μL） 100 100
充分混匀，25℃静置 2min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定
400nm 处吸光值，记为 A 对照管和 A 测定管，△A=A 测定管- A 对
照管
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.0581x -0.0169，R
2
=0.9982
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一
个酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/mg prot）= （△ A+0.0169）÷ 0.0581×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
= 17.21×（△ A+0.0169）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每克组织每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个
酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/g）=（△A+0.0169）÷0.0581×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每 104个细胞每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为
一个酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/104
cell）= （△A+0.0169）÷0.0581×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样
总）÷T
= 17.21×（△A+0.0169）÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每毫升血清每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一
个酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.0581×V 反总÷V 样÷T
= 17.21×（△A+0.0169）
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质
量，g；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min
b．用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.029x -0.0169，R
2
=0.9982
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每毫克蛋白每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一
个酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/mg prot）= （△ A+0.0169）÷ 0.029×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
= 34.42×（△ A+0.0169）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每克组织每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一个
酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/g）=（△A+0.0169）÷0.029×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T
= 34.42×（△A+0.0169）÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每 104个细胞每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为
一个酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/104
cell）= （△A+0.0169）÷0.029×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样
总）÷T
=34.42×（△A+0.0169）÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：在 45℃，pH7.5 条件下，每毫升血清每分钟水解产生 1μmol 4-硝基苯酚为一
个酶活力单位。
LPL 活性（μmol /min/mL）=（△A+0.0169）÷0.029×V 反总÷V 样÷T
= 34.42×（△A+0.0169）
V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质
量，g；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min
注意事项
1. 试剂三加入混匀后静置两分钟立即测定，否则影响吸光值。
2. 吸光值过或者测定结果不稳定，则将酶液进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀
释倍数
原创作者：赫澎（上海）生物科技有限公司
